天星健骨方对佐剂性关节炎大鼠CD3、CD4和CD8的影响

天星健骨方对佐剂性关节炎大鼠CD3、CD4和CD8的影响

杨晓军苗文丽裴林于素静郑惠军

杨晓军1苗文丽1裴林1*于素静2郑惠军3

1河北省中医药研究院(河北石家庄050031)2唐山市第四医院

3唐山市卫生监督所

【摘要】目的观察天星健骨方对佐剂性关节炎大鼠外周血CD3、CD4和CD8的影响。

方法采用注射弗氏完全佐剂制作大鼠佐剂性关节炎模型，将造模成功的50只SD大鼠随机分为模型组、天星健骨方低、中、高剂量组(0.4、0.6、0.8g/kg)、雷公藤多甙组(0.05g/kg)各10只，另设正常组(10只)。采用流式细胞仪检测大鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+细胞的变化。结果中药中、高量剂量组可明显减少CD4+细胞数，降低CD4+/CD8+的比值(P＜0.05或P＜0.01)。结论天星健骨方能调节佐剂性关节炎模型大鼠CD3、CD4和CD8，这可能是其作用机制之一。

【关键词】天星健骨方佐剂性关节炎CD3CD4CD8

［中图分类号］R969.4［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2011)12-03-02

EffectsofTianxingJianguRecipeonCD3、CD4andCD8ofAdjuvantArthritisRatYANGXiao-jun1，MIAOWen-li1，PEILin1，YUShu-jing2，ZHENGHui-jun3(1.HebeiAcademyofTraditionalChineseMedicine，Shijiazhang050031，China；2.theFourthHospitalofTangshan，Hebei063000，China；3.HealthSupervisionInstituteofTangshan，Hebei063000，China)

【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofTianxingjiangurecipeonCD3、CD4andCD8Tcellsofadjuvantarthritis(AA)inrats.MethodsFreund′scompleteadjuvantwasusedtoinduceAAinrat.Fiftysuccessfully-mademodelswererandomizedintomodelgroup,Tianxingjiangurecipesmall-dosagegroup、middle-dosagegroup、large-dosagegroup(0.4、0.6、0.8g/kg),andTGgroup(0.05g/kg),with10ineach.Andanormalgroupwith10rats.TheCD3+、CD4+andCD8+Tcellinperipheralbloodweredetectedbyflowcytometer.ResultsComparedwithmodelgroup，Tianxingjiangurecipelarge-dosagegroupandmiddle-dosagegroupshowedthatthenumberofCD4+cellsandtheratioofCD4+/CD8+markedlydecreased(P＜0.05orP＜0.1).ConclusionTianxingjiangurecipeiseffectiveincuringadjuvantarthritis(AA)onratsanditispossiblyrelatedwithregulatetheturbulenceofperipheryabnormalTcellsubgroupsofadjuvantarthritisrats.

【Keywords】Tianxingjiangurecipe；adjuvantarthritis；；CD3；CD4；CD8

类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的自身免疫性疾病，发病机理尚未完全明确，亦缺乏根治及预防本病的措施。近年来发现，T细胞构成改变和功能紊乱在其发生和发展中起着关键作用，尤其是CD4+T细胞参与RA的激发和延续［１］。本文通过观察天星健骨方对佐剂性关节炎模型(Adjuvantarthritis，AA)大鼠(AA大鼠)的T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8的水平的影响，探讨该方治疗类风湿性关节炎的作用机理。

1材料与仪器

1.1实验动物60只健康雌性Sprague-Dawley大鼠，清洁级，起始体重为(200±20)g，由河北医科大学实验动物中心提供(合格证编号：810024)。适应性饲养1周，自由饮食，12h光亮/黑暗条件、23～26℃环境温度，单笼喂养。

1.2药物天星健骨方由雷公藤、制南星、土茯苓、青风藤、薏苡仁、骨碎补等组成，中药饮片由河北省中医药研究院饮片厂提供，由河北省中医药研究院制剂室制成浓缩胶囊。雷公藤多甙片为黄石飞云制药有限公司产品，批号：ZJ0010，规格：10mg/片。

1.3试剂与仪器弗氏完全佐剂(FCA)由Sigma公司提供；荧光素异硫氰酸标记的抗大鼠CD3(FITC-CD3)、藻红蛋白标记的抗大鼠CD4(PE-CD4)、藻红蛋白标记的抗大鼠CD8(PE-CD8)均为美国eBio-science公司产品；流式细胞仪为美国BeckmanCounter公司。

2方法

2.1造模建立与分组60只大鼠依据随机数字表分成正常组10只、免疫造模组50只。对每只动物进行标记。造模方法［２］为将大鼠固定，在每只大鼠左足垫皮下注射弗氏完全佐剂(FCA)0.lml，正常对照组以同样方法同时注射等量生理盐水，然后每天观察药物反应。至造模第12天，将AA大鼠随机分为模型组、天星健骨方低量组、中量组、高量组、雷公藤多甙组，每组10只。

2.2给药方法于造模第12天开始，正常组、模型组灌服生理盐水(10ml/kg)；天星健骨方低、中、高剂量组分别以混悬液(生药含量经0.4、0.6、0.8g/kg)灌胃；雷公藤多甙组混悬液(0.05g/kg)灌服。每天１次，持续至28天。常规喂养，自由进食饮水。

2.3实验方法于造模后第28天心脏取血［３］，采集肝素抗凝血3ml/只，进行T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8测定，荧光标记单克隆抗体与抗凝全血或制备的淋巴细胞悬液，室温标记后按流式细胞仪规程操作检测。

2.4统计学处理所有数据均采用SAS6.12统计软件进行分析，各组检测结果以(X〖TX-]±s)表示，组间比较采用单因素方差分析。

3结果

各组大鼠CD3、CD4、CD8含量的比较模型组与正常组比较CD4+细胞数升高，CD8+细胞数降低，CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05)，中药中高量组和雷公藤多甙组可明显减少CD4+细胞数，降低CD4+/CD8+的比值(P＜0.05或P＜0.01)，中药高量组能轻度升高CD8+T细胞数。见表1。

表1各组大鼠CD3、CD4、CD8含量的比较(X[TX-]±s)

注：与模型组比较，*P<0.05，**P＜0.01；与正常组比较#P<0.05.

4讨论

类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫病，其病理特征为对称的、周围性多关节、滑膜慢性炎症，渗液、血管豁(肉芽肿)形成，炎性病变可侵及下层的软骨和骨造成破坏［４］。大量的研究表明，T胞在RA发病和病理持续进展中起着重要作用［５］。CD4+细胞数目的增多对RA的激发和延续有促进作用。CD8是抑制性T细胞(Ts)的标志，具有辅助T细胞活化，抑制B细胞合成和分泌抗体等作用。目前以CD4+、CD8+评价机体在不同状态下的免疫功能，CD4+、CD8+细胞数目的变化，尤其是CD4+/CD8+比值的异常是RA发生免疫损伤的中心环节，CD4+/CD8+比值升高，免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应［６］。

RA属于中医痹病范畴，在长期的临床实践中，采用天星健骨方对本病的治疗积累了丰富的经验，为了进一步验证对类风湿关节炎的治疗作用和探讨其治疗作用的机理，我们进行了动物实验结果显示，CD4+细胞数升高，CD8+细胞数降低，CD4+/CD8+比值明显升高，提示RA辅助性T细胞数量增多，而抑制性T细胞数量则减少，反映RA病程中存在细胞免疫调节异常。齐静姣等的相关研究也印证这样的过程［７］。经中药天星健骨治疗组可明显减少CD4+细胞数，降低CD4+/CD8+的比值，说明中药治疗能使失调的T细胞亚群恢复平衡，这可能是治疗RA的机制之一。

参考文献

［１］郭丽丽.T细胞在类风湿关节炎中的作用［Ｊ］.上海免疫学杂志，2002，3(22)：213-5.［2］张均田.现代药理实验方法［Ｍ］.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998：1383.

［3］张颖，望文桢.大鼠心脏采血的几点体会［Ｊ］.实验动物科学,2008，25(1)：70［4］吴东海，王国春.实用临床风湿病学［Ｍ］.北京：中国医药科技出版社2001，1253-272.

［5］莫选荣，罗心静.类风湿性关节炎发病机制的研究进展［Ｊ］.医学临床研究，2007，2(24)：336-9.

［6］张罗修.免疫药理学［Ｍ］.上海:上海医科大学出版社，1990，76-78

［7］齐静姣，张平，熊小华.T淋巴细胞协同刺激分子表达异常与类风湿性关节炎患者免疫功能紊乱［Ｊ］.临床荟萃，2007，22(3)：174-6.