免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平及其临床意义

免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平及其临床意义

陈浩明

郴州市中医医院湖南郴州423000

摘要：目的：分析血清S-甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDHS）抗体水平检测对免疫性不孕症患者的临床意义。方法：同期选取我院2017年6月至2019年6月收治的118例免疫性不孕症患者及100例健康对照者进行调查，使用酶联免疫法对全部受试者的血清GAPDHS抗体水平进行检测，分析其对免疫性不孕症患者的临床意义。结果：免疫性不孕症患者的GAPDHS抗体水平为（85.2±19.4）μg/mL，健康对照者的GAPDHS抗体水平为（33.5±5.8）μg/mL，对比存在统计学差异（P＜0.05）。与女性、继发性、TAT≤8的不孕症患者相比，对应的男性、原发性、TAT＞8的不孕症患者的GAPDHS抗体水平较高（P＜0.05）。结论：免疫性不孕症患者的血清GAPDHS抗体水平显著升高，其可作为不孕症诊断的临床指标。

关键词：S-甘油醛-3-磷酸脱氢酶；免疫性不孕症；TAT试验

不孕症是多种病因致生育障碍引发的育龄夫妇的生殖健康不良事件，其中20-40%为免疫性不孕症患者。有文献表明[1]，自身免疫性抗体表达异常与免疫性不孕症存在密切关系，其中S-甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDHS）是精子产生的特异性酶，作为精子相关抗原，GAPDHS自身抗体可以引起正常精子发生凝集，致使小鼠引发不孕。基于此，本研究以我院2017年6月至2019年6月收治的免疫性不孕症患者为调查对象，进一步探讨了免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平的检测价值。现报告如下。

1资料和方法

1.1一般资料

选取我院2017年6月至2019年6月收治的免疫性不孕症患者118例，同期纳入健康对照者100例。入选标准[2]：免疫性不孕症患者符合免疫性不孕症的诊断标准，均参照WHO指南施行浅盘精子凝集试验检测；健康对照者无任何临床症状及实验室检查异常结果，抗精子抗体阴性；此次研究经医院伦理委员会审核批准，所有受试者均知情同意。排除标准：其他因素导致的不孕症患者；有肿瘤、肝肾疾病、免疫相关疾病等病史者。免疫性不孕症患者中，男性22例，女性96例；年龄24-42岁，平均（31.9±5.8）岁；原发性不孕症76例，继发性不孕症42例；TAT＞8者78例TAT≤8者40例。健康对照者中，男性18例，女性82例；年龄22-46岁，平均（32.8±4.6）岁。免疫性不孕症患者与健康对照者相比，一般资料的差异无统计学差异（P＞0.05）。

1.2方法

所有受试者于清晨空腹抽取外周静脉血5mL，置于促凝管中，以3000r/m的速度离心10min，使用EP管收集上层血清，在-80℃的环境中保存，最后进行酶联免疫法（ELISA）检测。于100μＬ的碳酸氢盐缓冲液中对200ng的GAPDHS纯化蛋白进行稀释，加入至96孔微量滴定板中孵育过夜（4℃环境）；之后利用苯二甲酸丁二醇酯（PBST）对96孔板进行3次冲洗，每孔加入含1%牛血清白蛋白（BSA）的PBST100μＬ，封闭1h，随后PBST冲洗3次。免疫性不孕症患者、健康对照者的待测血清及抗GAPDHS抗体标准品与样本稀释液按照1:1000的比例稀释之后，每孔加入100μＬ稀释后的样本液及标准品，并在37℃的环境中孵育2h，之后再加入清洗液洗涤3次，每次洗涤5min，紧接着加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，在37℃的环境中孵育2h后再次冲洗3次，多余未结合检测抗体洗去后，加入底物溶液反应10min，加入2M硫酸终止液，利用酶标仪对每个孔490nm的OD值进行检测，最后取3个复孔平均值获得每个样本的OD490值，以此得到抗GAPDHS的水平。

1.3统计学处理

软件包SPSS23.0分析研究数据，计数、计量资料采用x2或t检验，P＜0.05提示组间对比存在统计学差异。

2结果

118例免疫性不孕症患者的GAPDHS抗体水平为（85.2±19.4）μg/mL，100例健康对照者的GAPDHS抗体水平为（33.5±5.8）μg/mL，二者对比存在统计学差异（P＜0.05）。根据免疫性不孕症患者临床特征的不同进行分类，男性不孕症患者GAPDHS抗体水平高于女性不孕症患者，原发性不孕症患者GAPDHS抗体水平高于继发性不孕症患者，TAT＞8的不孕症患者GAPDHS抗体水平高于TAT≤8的不孕症患者，组间对比均存在统计学差异（P＜0.05），见表1。

3讨论

近年来，研究发现抗精子抗体与免疫性不孕症存在密切相关，在不孕夫妇中检出抗精子抗体的几率高达30%[3]。抗精子抗体主要通过影响精子运动、干扰受精、顶体反应等机制发挥对受孕的抑制作用。目前，临床借助浅盘精子凝集试验即可发现免疫性不孕症患者体内是否存在抗精子抗体。GAPDHS是糖酵解反应和糖异生反应必不可少的酶，其催化甘油醛‐3‐磷酸氧化磷为甘油酸‐1‐3‐二磷酸的反应过程合成ATP，能够供应精子能量，从而影响精子活力及生育能力[4]。GAPDHS一般在睾丸中表达，正常生理状态下，机体免疫系统无法识别此类抗原，但男性生殖系统发育障碍等异常状况发生时，GAPDHS会被释放入血，继而刺激免疫系统产生自身抗体，影响精子活力下降，造成睾丸生殖细胞损伤，最终导致不孕发生。有研究指出[5]，免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平升高达到健康人群的2.7倍，男性、女性免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平升高则分别达到健康人群的3.6倍与2.5倍，原发性与TAT＞8的不孕症患者血清GAPDHS抗体水平升高达到健康人群的3.1倍。本研究中，免疫性不孕症患者的GAPDHS抗体水平显著高于健康对照者（P＜0.05）；同时对GAPDHS抗体水平与不孕症患者临床特征之间的关系进行分析，我们发现男性、原发性、TAT＞8的不孕症患者的GAPDHS抗体水平较高，与女性、继发性、TAT≤8的不孕症患者相比具有统计学差异（P＜0.05）。说明免疫性不孕症患者血清GAPDHS抗体水平明显升高，尤以男性、原发性、TAT＞8的不孕症患者GAPDHS抗体水平的升高更为突出，提示GAPDHS抗体水平检测对免疫性不孕症的疾病诊断有一定的临床意义。

综上所述，GAPDHS自身抗体与免疫性不孕症存在密切关系，检测血清GAPDHS抗体水平用于不孕症的诊断有一定的临床意义。

参考文献：

[1]冯秀银.不孕症患者血清免疫性抗体检测的临床价值与治疗体会[J].中华全科医学,2013,11(10):1563-1564.

[2]钟文富,曾灏,杨元伍.血清及宫颈黏液中自身抗体在女性不孕症患者中的表达及临床意义[J].国际检验医学杂志,2018,39(13):1553-1556.

[3]王红,麻安喆,汤莉.继发性不孕症与免疫性抗体及性激素水平相关性研究[J].中国卫生检验杂志,2016,26(13):1886-1887,1891.

[4]张智虹,王瑶,申超.免疫性抗体联合病原体检测在女性不孕症诊断中的应用[J].齐齐哈尔医学院学报,2016,37(05):602-603.

[5]戴钰,蒋丽华,黄肖孝.免疫性不孕患者抗心磷脂抗体、抗卵巢抗体和抗精子抗体的检测价值[J].实用妇科内分泌杂志,2018,5(35):105-106.