正骨伸筋胶囊中马钱子碱及士的宁成分高效液相色谱研究

正骨伸筋胶囊中马钱子碱及士的宁成分高效液相色谱研究

杨少辉许红霞刘晓云王芳王岩红

杨少辉许红霞刘晓云王芳王岩红

（山东省文登整骨医院山东威海264400）

【摘要】正骨伸筋胶囊是我院传统中药制剂，有半个世纪的应用历史，由炒地龙、制马钱子、烫骨碎补、桑寄生等多味药组成，其疗效确切，临床应用广泛，可用于舒筋通络，活血祛瘀，消肿止痛。

【关键词】马钱子；高效液相色谱法；士的宁

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）04-0056-03

Bonesettingcommonclubmosscapsulecompositionofstrychnineandbrucineinhighperformanceliquidchromatography(HPLC)YangShaohui,XuHongxia,Liuxiaoyun,WangFang,WangYanhong.TheboneHospitalofWendeng,inShandongProvince,Weihai264400,China

【Abstract】BonesettingcommonclubmosscapsuleisatraditionalChinesemedicinepreparation,theapplicationofhalfacenturyofhistory,bytheearthworm,ironnuxvomica,rhizomadrynariae,mulberryparasitismandsoonmanykindsofmedicine,thecurativeeffect,extensiveclinicalexperienceintheapplication,canbeusedinthetendonst2dm,activatingbloodandremovestasis,swellingandpain.

【Keywords】Nuxvomica；Highperformanceliquidchromatography；Strychnine

正骨伸筋胶囊是我院传统中药制剂，有半个世纪的应用历史，由炒地龙、制马钱子、烫骨碎补、桑寄生等多味药组成，其疗效确切，临床应用广泛，可用于舒筋通络，活血祛瘀，消肿止痛。为了建立正骨伸筋胶囊中的质量控制方法，参照2010年版《中国药典》马钱子项下的含量测定方法[1]，确定用高效液相色谱法测定正骨伸筋胶囊中马钱子碱及士的宁含量。

1.仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪，VWD检测器；梅特勒XP205电子分析天平；马钱子碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号110706-200505）；士的宁对照品（中国食品药品检定研究院，批号110705-200306）；正骨伸筋胶囊（文登整骨医院，批号140504、140505、140606）；乙腈为色谱纯，庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、磷酸为分析纯，水为超纯水。

2.方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：DiamonsilC18(2)150×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调pH2.8）=25:75；检测波长为260nm；进样量：10μl；流速：1.0ml/min；理论板数按士的宁峰计算不低于5000。

2.2对照品溶液的制备

取士的宁对照品18mg、马钱子碱对照品10mg，精密称定，分别置于10ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含士的宁0.18mg、每1ml含马钱子碱0.1mg）。

2.3供试品溶液的制备

取正骨伸筋胶囊20粒，倾出内容物，取约2.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液6mL，混匀，放置30min；精密加三氯甲烷350mL，密塞，置水浴中回流提取2h，提取液减压蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25mL量瓶中,摇匀,用0.5μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4专属性试验

取处方中除去制马钱子后的其他药味，按处方比例制成阴性对照样品，取约2.5g，按2.3项方法制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应色谱峰，而阴性对照色谱中无相应色谱峰，表明处方中其他药味对测定结果无干扰，见图1。

2.5线性与范围

分别精密吸取“2.2”项下的马钱子碱和士的宁对照品储备液（马钱子碱1.2mg/ml，士的宁1mg/ml）0.8,0.9,1.0,1.1,1.2ml，置10ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列浓度（5个浓度）对照品溶液。精密吸取对照品溶液10μL分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以马钱子碱和士的宁的进样浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标,进行线性回归，绘制线性曲线，得马钱子碱和士的宁的线性回归方程分别为：Y=7383X-35.15，r=0.9994；Y=3856X-35.08，r=0.9996。结果表明马钱子碱在0.08～0.12μg/ml浓度范围内成的线性关系良好，士的宁在0.144～0.216μg/ml浓度范围内成的线性关系良好。

2.6加样回收率试验

精密称取已知含量的正骨伸筋胶囊适量（约相当于马钱子碱1.33mg，士的宁2.27mg），精密称定，共取9份，每份3组，按照高、中、低3个水平分别以样品中马钱子碱和士的宁含有量的80%，100%，120%精密加入各对照品适量，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按测定方法进行检测，计算马钱子碱和士的宁的回收率，见表1、2，总回收率（n=9）分别为98.2%，98.9%，说明该方法准确度良好。

表1马钱子碱加样回收率试验结果

2.7重复性

取装量差异项下本品，分别取6份，精密称定，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液，进行测定。结果马钱子碱和士的宁含量分别平均值分别为100.2%，100.1%；RSD分别为0.469%,0.196%，表明本测定方法重复性良好。

2.8精密度试验

按照“2.1”项下色谱条件，取同一混合对照品溶液连续进样6次，测定马钱子碱和士的宁峰面积的RSD分别为0.887%，0.955%，表明仪器精密度良好。

2.9溶液稳定性试验

取供试品溶液，室温放置，分别于配制后0,2,4,6,12,18h，进样测定，测得马钱子碱峰面积为RSD=1.22%；士的宁峰面积为RSD=0.635%。结果表明供试品溶液在18小时内稳定。

2.10含量测定

取批号为140504、140505、140606的正骨伸筋胶囊20粒，倾出内容物，取约2.5g，精密称定，分别按照“2.3”项下的方法配制供试品溶液，进行色谱测定，记录马钱子碱和士的宁峰面积，以外标法技术含量，结果见表3。

表33批正骨伸筋胶囊中马钱子碱和士的宁含量测定结果

批号马钱子碱含量mg/g士的宁含量mg/g

1405011.33252.2686

1405021.33192.2684

1405031.33202.2686

3讨论

3.1提取方法的选择

本实验分别考察了水浴加热回流提取1小时、2小时和3小时对马钱子碱和士的宁的提取率的影响。结果发现第一种方法提取率约为70%～80%，第二、三种方法提取率均约为90%～95%，二者没有显著差异，故此，选择操作时间相对较短的2小时加入回流提取。

3.2提取溶剂用量的选择

分别考察了三氯甲烷30ml，50ml，70ml的提取，考察对样品中马钱子碱和士的宁的提取率的影响。结果发现提取溶剂用量影响不显著。为了减少后处理工作强度，选择30ml三氯甲烷提取。

3.3本文采用HPLC法测定正骨伸筋胶囊中马钱子碱、士的宁的含量，其方法灵敏、专属性强、准确、简便，重现性好，适用于正骨伸筋胶囊质量标准控制，保证用药安全性。

【参考文献】

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版(一部)[S]．北京:中国医药科技出版社，2010:767．