男性少弱精子症不育患者精子DNA碎片检测情况研究

男性少弱精子症不育患者精子DNA碎片检测情况研究

伍细言

湖南省妇幼保健院生殖中心湖南长沙410008

【摘要】目的：探究男性少弱精子症不孕患者的精子DNA碎片的检测分析情况。方法：2013年4月至2015年10月期间，我院不孕不育科接受治疗的少弱精子症不孕男性患者55例作为观察组观察对象，观察同期在我院体检的正常健康男性55例作为对照组观察对象，对患者的精液各项指标分析，同时分析精液中DFI与精子的密度、活动率以及正常形态率和前向活动精子间的分布关系情况。结果：观察组不育症患者的DFI、精子密度、活动率以及正常形态率和前向活动精子指标有显著差异，数据分析符合统计学判断标准（P＜0.05）。在精子DNA碎片指数与精液的常规指标的分布中可见其相关系数分布明显，其DFI指标越高，精液常规指标越差，指标呈负相关。结论：男性少弱精子症不孕患者其DNA完整度较差，可结合其对男性生育能力做相应的评估。

【关键词】男性不育；DNA碎片；少弱精子症

不孕不育是生殖科较为多见的病症，其中男性不育因素占据约50％，临床检查和诊断中应用传统的精液检查是确诊的重要指标，但是其参数都不被世界卫生组织认可[1]。因此在男性不育症的临床诊断中寻求更有说服力的指标非常重要，其中近年来，精子DNA完整性成为研究的热点，其是通过检查反应精子DNA的完整性[2]。本研究对一段时间内我院接受治疗的男性少弱精子症不育患者精子DNA碎片的观察分析，取得了显著结果，现对此做相关报道。

1资料与方法

1.1一般资料

2013年4月至2015年10月期间，我院不孕不育科接受治疗的少弱精子症不孕男性患者55例作为观察组观察对象，其年龄在22~40岁，平均年龄为30.4岁，其不育的时长在3~18年，平均为7.2年；选取同期在我院体检的正常健康男性55例作为对照组观察对象，其年龄在22~41岁，平均年龄为30.6岁，其不育的时长在3~17年，平均为7.0年。所有研究对象的染色体检查显示其基因核型均为（46，XY），并且未见Y染色体臂的缺失或者异常。

1.2方法

所有受检者均要禁欲4~5天后进行手淫精液收集，并且待精液液化后结合相应的仪器进行精液各项指标检测和分析，精液在常规分析后进行离心，将精浆去掉，然后加入EBSS进行精子密度的调节，然后取20µl进行玻片涂抹，然后在导致显微镜下观察精子的密度，并且做相应调整后放入烤箱中烘干[3]，然后采用伊红液配置好后备用，将精子干燥后采用乙醇半小时固定，然后取出后结合苏木素进行染色，染色持续5min后取出流水冲洗干净，将水滴干后放入伊红染色液中进行持续45~60s的染色，然后进行流水冲洗，玻片干燥后结合树脂封片后进行备查，同时分析精液中DFI与精子的密度、活动率以及正常形态率和前向活动精子间的分布关系情况[4]。

正常精子的判定标准为其精子的头部处于光滑的卵圆形，并且长度在3~5µm，宽度保持在2~3µm，其头宽和头长呈一定比例，并且顶体占据头的50％~70％，中部呈现细长状态，并且与头的纵轴呈一条直线，其中部的宽度不足1µm，并且为头宽的一般[5]；并且其尾部的长度约为45µm，并且呈现较为规则的形态，无卷曲情况，比中部要稍微细一些。另外一些处于临界状态的精子均确定为异常，同时其头部接近椭圆，或者伴随有其他缺陷的都确定为异常；异常的精子多为顶体过大、圆形头、顶体过小、梨行头以及不规则形头、长形头以及尾部卷曲等[6]。

1.3采用SCD实验进行精子DNA碎片检测

结合精子Halospem试剂盒进行检测，其步骤严格按照说明书进行，在染色完成后在光镜下进行相应碎片的观察和计算。

1.4统计学处理

本研究中少弱精子症不育男性患者和正常男性的基础资料均采用SPSS22.0软件包处理，计量资料采用平均值表示，计量资料和计数资料的最间对比分别应用t检验和卡方检验，P＜0.05为差异显著的判断标准。

2结果

观察组不育症患者的DFI、精子密度、活动率以及正常形态率和前向活动精子指标有显著差异，数据分析符合统计学判断标准（P＜0.05），详细数据见表1。在精子DNA碎片指数与精液的常规指标的分布中可见其相关系数分布明显，其DFI指标越高，精液常规指标越差，指标呈负相关，详细数据见表2。

3.讨论

有研究显示精子的DNA断裂与男性不育有着很密切的关系，并且决定了胚胎期的发育，在辅助生殖的周期中，DNA的完整性损伤会导致后期的流产和胚胎停止发育率发生较高，同时表明保持精子DNA完整更能够保证其成功受精和着床[7]。

本研究中，观察组不育症患者的DFI、精子密度、活动率以及正常形态率和前向活动精子指标有显著差异，数据分析符合统计学判断标准（P＜0.05）。在精子DNA碎片指数与精液的常规指标的分布中可见其相关系数分布明显，其DFI指标越高，精液常规指标越差，指标呈负相关。因此，男性少弱精子症不孕患者其DNA完整度较差，可结合其对男性生育能力做相应的评估。

参考文献：

[1]杨晓玉，王莉莉，陈萍，张燕，张琳，崔毓桂，张炜，刘嘉茵.精子DNA碎片指数和精子畸形率对ICSI临床结局的影响[J].中华男科学杂志，2013，19（12）：1082-1086.

[2]徐秀民，于德新，张志强，谢栋栋，王毅，张涛，陈磊，闵捷，丁德茂，邹慈.男性不育患者精子DNA损伤与非整倍体精子的研究[J].安徽医科大学学报，2013，59（11）：1355-1359.

[3]马强，刘春莲，李元杰，景万红，徐仙，焦海燕.RNF8基因遗传变异与吸烟饮酒的交互作用对精子DNA碎片率和原发性男性不育的影响[J].重庆医学，2013，42（33）：3983-3985.

[4]马强，刘小霞，杨杰，刘春莲，李元杰，闫有圣，徐仙，景万红，焦海燕.切除修复交叉互补组5基因rs17655多态性对精子DNA碎片率和原发性男性不育的影响研究[J].中国全科医学，2013，16（38）：3817-3820.

[5]许金榜，黄海龙，康跃凡，林典梁，王燕，杜生荣，陈永艳.男性少弱精子症不育患者精子DNA碎片检测情况分析[J].中国现代医学杂志，2013，23（23）：75-78.

[6]杨译，姜辉，张海娇，洪锴，唐文豪，赵连明，毛加明，刘德风.男性不育患者年龄与精子DNA碎片和精液常规参数的相关性分析[J].中国性科学，2012，21（02）：17-19.

[7]孙振高，连方，姜鲲鹏，张建伟，马凤梅，张宁，孙金龙，杨武文.生精片对男性少弱精子症患者精液参数的影响及作用机制研究[J].中华男科学杂志，2012，18（08）：764-767.