KLF４、Sp１、Notch１和胃癌临床病理的相关性研究

KLF４、Sp１、Notch１和胃癌临床病理的相关性研究

谢春燕柯琦季语祝谢刚王安群杨永红景萌

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四川省绵阳市中心医院病理科四川绵阳６２１０００

【摘要】目的探讨KLF４、Sp１、Notch１在胃癌中的表达关系,揭示其与胃癌病理学的相关性.方法本次研究中使用免疫组织化学法分析１５例正常组织样本３和５０例胃癌组织样本中KLF４、Sp１及Notch１蛋白水平,并分析三者４表达水平与胃癌临床病理间的相关性.结果５在胃癌组织中KLF４、Sp１及Notch１阳性表达率显著高于正常组(P＜０．０５);KLF４在高、中、低分化型胃癌组织中的阳性率分型间差异具有统计学意义(P＜０．０５),Sp１及Notch１在高、中、低分化型胃癌组织中的阳性率差异无统计学意义(P＞０．０５);淋巴转移组患者其KLF４、Sp１及Notch１阳性率均显著高于无转移组(P＜０．０５).不同临床样本分级患者间KLF４、Sp１及Notch１阳性率差异存在统计学意义(P＜０．０５).结论KLF４、Sp１、Notch１在胃癌的病发及发展的病理学过程中起着十分重要的作用,且可能成为下一代治疗胃癌的全新靶点,为胃癌的临床治疗提供新的途径.【关键词】KLF４;Sp１;Notch１;胃癌病理;相关性【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionof,Sp１andKLF４ingastriccancer,andtorevealthecorrelationbetweentheexpressionof,Notch１andgastriccancer．MethodsthelevelsofSp１,Notch１andKLF４proteinin５０casesofgastriccancertissueswereanalyzedbyimmunohistochemicalmethodin１５casesofgastriccancertissues,andthecorrelationbetweenthethreeandtheclinicalpathologyofgastriccancerwasanalyzed．ResultsthepositiveratesofNotch１,Sp１andKLF４weresignificantlyhigherthanthoseinnormalgroup(P＜０．０５),KLF４,Notch１andSp１inhigh,mediumandlowdifferentiatedgastriccancertissuesweresignificantlyhigherthanthoseinnormalgroup(P＞０．０５)．ThepositiveratesofP＜０．０５,Notch１andKLF４weresignificantlyhigherthanthosewithoutmeＧtastasis(Sp１)．ThereweresignificantdifferencesinNotch１,Sp１andKLF４amongdifferentclinicalsamples(P＜０．０５)．ConclusionKLF４,Sp１andNotch１playanimportantroleinthepathologicalprocessofgastriccancer,andmaybecomeanewtargetforthenextgenerationofgastriccancer,andprovideanewwayforthecl【iKniecyalwotrrdesat】mentofgastriccancer．KLF４;Sp１;Notch１;gastriccancerpathology;correlation【中图分类号】R７３５．２【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０７９０－０２６

目前,胃癌是临床中最为常见的恶性肿瘤之一,在全球范围内其临床发病率及死亡率高居第二位.在胃癌的发病及发展过程中需要经历诸多阶段及步骤,其病理过程十分复杂,有学者从生物学角度分析认为胃癌的病发其根本原因为体内多种基因的病理性改变累积的结果.通常情况下,细胞内的抑癌基因、生长因子及癌基因共同调节以维持细胞的增殖与凋亡的动态平衡,但当细胞动态平衡遭受破坏后,可能诱发细胞出现癌变[１].本文旨在探讨KLF４、Sp１、Notch１在胃癌中的表达关系,揭示其与胃癌病理学的相关性.１资料与方法

１．１一般资料经我院伦理委员会批准,选取２０１３年１１月至２１０５年３月间我院７病理科收集的１５例胃镜下正常采集的非胃癌患者的胃粘膜活检样本集及５０例胃癌组织样本作为本次的研究样本.将所有患者依照胃镜检查特征及胃癌组织病理特征分为正常对照组１５例及胃癌组５０例.正常对照组中,男性９例,女性６例,年龄２５至７６周岁,平均年龄(４８．６９．８)周岁;胃癌组中,男性３１例,女性１９例,年龄２３至７８周岁,平均年龄(５１．４±８．６)周岁.此外,５０例胃癌组中高分化型１１例、中分化型２６例、低分化型１３例.依照美国肿瘤联合会(AJCC)所制定的TNM分期标准,８胃癌患者Ⅰ期９例,Ⅱ期１８例,Ⅲ期１７例,Ⅳ期６例.经分析,两组患者性别、年龄等一般临床资料间差异无统计学意义(P＞０．０５),分组合理.１．２方法１．２．１免疫组化将所有临床样本均使用石蜡进行包埋,后使用组织切片机将其切成４微米的免疫组化切片,使用枸橼酸盐进行抗原热修复,并使用DAB显色,严格依照说明书完成具体操作流程.其中,KLF４、Sp１及Notch１抗体均购买自CellSignalingTechnology公司(美国),DAB显影液及二抗均购买自中杉金桥.

１．２．２结果判定标准本次研究中KLF４表达于细胞质,Sp１表达于细胞核,Notch１表达于细胞质,若呈棕褐色则提示其为阳性.本次研究中使用二级计分法进行分析处理,选取切片中具有代表性的组织区,域进行观察,在高倍镜下选取５个随机视野,且每个视野中上皮细胞数不低于５００个.观察并计算IRS值,依照染色强度及阳性细胞比例进行半定量积分分析,染色强度:３分呈现明显的棕褐色,２分呈现较明显的棕黄色,１分呈现蛋黄色,０分无明显着色;依照阳性细胞数:０分,阳性细胞数低于５％;１分,阳性细胞数在５％至２４％间;２分,阳性细胞数在２５％至４９％间;３分,阳性细胞数在５０％至７４％间;４分,阳性细胞数大于７５％.后将两者积分值相乘,０至２分为无阳性表达,其余为阳性表达.１．３统计学方法本次研究使用SPSS１９．０软件包进行数理分析,使用率表示计数资料,并行卡方检验,使用Spearman秩相关进行相关性分析,其中P＜０．０５则认为差异具有统计学意义.２结果２．１胃癌临床组织中KLF４表达率结果本次研究结果显示,胃癌临床组织中KLF４阳性表达３９例,占７８．００％,正常胃粘膜组织中阳性其阳性表达７例,占４６．６７％,经分析,胃癌组KLF４阳性率显著高于正常组(P＜０．０５),详见表２－１.

表２－１胃癌临床组织中KLF４表达率结果

３讨论KLF４是最早鉴定自皮肤及肠道中的一类转录因子,其对细胞的凋亡以及增殖的调控起到举足轻重的作用[２－３].Sp１是一类广泛存在于人体各组织中的核转录调控因子,有研究发现其在肿瘤组织中异常高表达且活性明显升高,并参与肿瘤的病理学变化过程[４].Notch１是Notch受体家族的重要成员,其参与细胞的增殖、分化等功能在内的多种生物学过程,有研究发现Notch１通路的异常激活与肿瘤的病发及发展密切相关,但其在不同肿瘤组织中所起作用存在诸多差异甚至相反.KLF４主要表达在胃肠道增殖较慢、趋向分化的上皮细胞中.相关研究发现胃癌组织中KLF４表达与淋巴结转移、肿瘤细胞过甲基化密切相关.关于其抑癌机制的研究表明KLF４能够招募组蛋白去乙酰化酶到CD１１d启动子区,从而抑制该基因的表达,提示KLF４可能通过染色质重塑来抑制基因表达.但其具体作用机制尚待进一步研究[５－６].Notch信号是一种相对保守的细胞间相互作用机制,参与细胞增殖、凋亡和分化等多种生命活动.Notch１在肿瘤中起抑癌作用,如在食管鳞状细胞癌中激活的Notch１可诱导癌细胞生长停滞和凋亡,活化的Notch１信号可抑制人舌鳞状细胞癌体内、外肿瘤细胞的生长,同时伴随细胞周期的停滞和凋亡,

过表达Notch１胞内段可使肝癌细胞增殖抑制,同时检测到细胞周期改变和早期的凋亡信号.Notch１的这种相反作用可能是由于Notch１是在生物进化中高度保守并在多种组织细胞中广泛存在,其信号通路的广泛共享性,导致其功能的复杂多样.本次研究结果显示,胃癌组织中其KLF４、Sp１及Notch１的表达量与其病理学存在密切关系.组织中KLF４出现异常的低表达甚至缺失状态,而Sp１及Notch１在癌组织中异常高表达状态,造成癌细胞呈现异常高增殖活性及分化活性.此外,Notch１可以负性调节KLF４,Sp１可以竞争性抑制KLF４活性,三者在胃癌的病发及发展的病理学过程中起着十分重要的作用,且可能成为下一代治疗胃癌的全新靶点,为胃癌的临床治疗提供新的途径.

参考文献[１]崔晋峰,赵晨燕,曹立勇等．食管胃交界腺癌和远端胃癌KLF４SP１及CyＧclinD１表达的对比研究[J]．中国肿瘤临床,２０１４,３１(２):１０８－１１２．[２]毛华辉,卢国春,方复等．Kruppel样因子４蛋白在胃癌血管生成及预后中的作用[J]．中华实验外科杂志,２０１５,３２(２):３２６．[３]何黎黎,张富花,张锦华等．胃癌中Notch１、DLL４和HES１的表达及其与临床病理特征和预后的关系[J]．国际消化病杂志,２０１５,３５(２):１３２－１３５．[４]周尘飞,计骏,袁菲等．贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤血管内皮细胞生长因子和核转录因子Sp１表达的影响[J]．中华胃肠外科杂志,２０１２,１５(２):[１８０－１８４．５]张鹏程,梁鲁,周大可等．转录因子Sp１及stat－３在胃癌中的表达及意义[J]．中国普通外科杂志,２０１４,２３(１２):１７１４－１７１７．[６]张富花,何黎黎,张锦华等．胃癌中Notch１、DLL４、HES－１表达与微血管、微淋巴管生成的关系及意义[J]．国际肿瘤学杂志,２０１４,４１(１０):７８９－７９２．