革兰阳性厌氧杆菌检测

革兰阳性厌氧杆菌检测

吴彩虹

吴彩虹(黑龙江省呼玛县人民医院165100)

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)35-0470-02

【摘要】革兰阳性无芽胞厌氧杆菌大致包括9个菌属(包括新增3个菌属)，本文仅介绍5个菌属。A.放线菌属放线菌属(Actinomyces)细菌是革兰阳性无芽胞厌氧丝状杆菌，据1986年第9版《伯杰系统细菌学手册)第二卷所记载，包括12个菌种。

【关键词】革兰阳性无芽胞厌氧杆菌检测

(一)生态

放线菌是人口腔、肠道、女性生殖道正常菌群。不少菌种也是动物口腔或肠道正常菌群，如牛型放线菌(A.bovis)、粘性放线菌(A.viscosus)、住齿放线菌(A.denticolens)，以及豪威放线菌(A.howellii)、受损大麦放线菌(A.hordeovulneris)和猪放线菌(A.suis)，而个别菌种如腐生放线菌(A.humiferus)是肥沃土壤中常住菌之一。

(二)生物学性状

1.形态放线菌属细菌形态多样，有直，有弯，不分枝或分枝，多半为革兰阳性丝状杆菌，菌丝可断裂成细长杆菌，形态似假白喉杆菌。菌体呈棒状，染色不均，排列成X、Y、V、栅状或短链。无荚膜，无鞭毛，有些菌种所产生菌丝可缠绕成团，形成小菌落，可在病人的脓汁中出现，呈黄色，又称为硫黄颗粒，是放线菌感染的重要特征之一。

2.培养除了衣氏放线菌、溶牙放线菌、梅氏放线菌为微需氧菌外，其余多为兼性厌氧菌，故在含5％～10％CO2时生长最好，但生长仍很缓慢，需5～7d才出现菌落。直径0.5～3mm的典型菌落为粗糙型、灰白色，有些菌如溶牙放线菌形成红色菌落，粘性放线菌形成粘性菌落，不易挑起和乳化。但约有1/3菌落呈光滑型，直径1mm，圆，发亮，微凸，边缘整齐，生长快，2～3d就出现菌落，也易于挑起和乳化。在液体培养基中沉于管底像一团绒线，这是菌丝沉积物。

3.特征多数菌种能发酵葡萄糖等，其发酵糖的主要代谢产物是琥珀酸(S)，或还有少量的乳酸(L)和醋酸(A)，但绝不产生丙酸。液化明胶产生吲哚，触酶试验多为阴性，但硝酸盐还原多数菌种为阳性。生长最适pH值为6.5～7.0。

(三)致病性和免疫性

1.对牙面的粘附放线菌中粘性放线菌、衣氏放线菌和溶牙放线菌对牙面有很高的亲和力，它们以高数量粘附在牙面上。牙面获得膜中一些成分，如富脯蛋白和富酪蛋白明显地促进了它们的粘附。此外，它们对组成牙本质和牙骨基质的主要成分胶原也有很强的亲和力，这也促进了它们在根面的粘附。

放线茵不仅作为粘附支架，形成谷穗状结构，加速了菌斑形成，且随菌斑的成熟，粘性放线菌的量不断增加。其对粘附起主要作用的结构是菌毛，其中菌毛Ⅱ还介导了与变链球菌、血链球菌、牙龈普氏菌及具核梭形杆菌等细菌的集聚和对上皮细胞的粘附，并且菌毛Ⅱ也能促进粘性放线菌对3一HA的粘附。

2.放线菌还产生涎酶(又称神经氨酸酶)也可促进其与其他细菌、上皮细胞及红细胞的粘附。这是因为此酶可使细胞膜上的糖蛋白及糖脂成分发生改变，暴露出半乳糖及相关成分，而半乳糖是放线菌菌毛Ⅱ及其他一些细菌的受体，从而促进了细菌的粘附。近年对放线菌中编码涎酶的基因和序列进行了较深入的研究，已经克隆出此酶的基因(nanH)。它由2703个bp组成，编码产物901个氨基酸，相对分子质量为92871，等电点为5.72，G+Cmol％为71％。

3.口腔放线菌与龋病密切相关。口腔放线菌可发酵多种碳水化合物产酸，使菌斑pH值降至5.0以下，且对牙面特别是根面有很高的亲和力。一些放线菌还能合成细胞外多糖和细胞内多糖，这些特性决定了它在龋病中的作用，虽然根部龋的主要致病菌是变链球菌，但是放线菌在致龋过程中的协同作用不能忽视，尤其是放线菌与根面龋的发生关系更密切。除了与口腔致龋有关外，放线菌还能引起面颈部放线菌病。

(四)微生物学检验

本菌属尽管包括12个菌种，但是住齿放线菌(A.denticolens)和豪威放线菌(A.howellii)多分离自牛口腔牙菌斑中，并且猪放线菌(A.suis)和腐生放线菌(A.humiferus)两菌的分类学位置尚未确定。另有3个新增放线菌即杰格放线菌(A.georgiae)、杰锐斯放线菌(A.gerencseriae)和白纳德放线菌(A.bernardiae)。

B.丙酸杆菌属

丙酸杆菌属(Propionbacterium)细菌是革兰阳性无芽胞厌氧杆菌，据1986年第9版《伯杰系统细菌学手册》第二卷所记载，包括两大群共8个菌种。

致病性与免疫性

丙酸杆菌尤其是疮疱丙酸杆菌主要栖居在人的毛囊、汗腺、皮脂腺管中，产生酶可使皮脂中的类脂形成长链脂肪酸，刺激局部产生炎症并引起皮脂管梗阻形成粉刺或毛囊炎。此外，因为它们正常就栖居皮肤上，所以采血、腰椎穿刺或骨髓穿刺培养时本菌也是最常见的污染菌。丙酸杆菌细胞壁成分中缺少分枝菌酸和阿拉伯半乳聚糖，胞壁脂质中脂肪酸是C15异构酸，具免疫原性，胞壁成分能刺激机体产生相应免疫球蛋白如IgM或IgG等。

微生物学检查

根据疾病种类不同采集血液、脓液、伤口或软组织溃疡灶分泌物等标本送检，经厌氧培养分离分纯后可进一步进行菌种鉴定。

C.优杆菌属

优杆菌属细菌(Eubacterium)，有些资料译成真杆菌，其实“Eu”是良好、有益之意，不是真伪之义，故译成优杆菌属更为准确。

致病性与免疫性

优杆菌属菌种加上新增的两个菌种共为36个菌种，其中口腔中可见的有7个菌种，即不解乳优杆菌、砂优杆菌、短优杆菌、缠结优杆菌、胆怯优杆菌、迟缓优杆菌、粘液优杆菌，它们专性厌氧程度高，不少菌株只能在预还原培养基上生长，所有厌氧菌中因为此菌属培养不易，因此它是目前对其致病性、分类学、免疫性研究最落伍的一个菌属。本文只能综合些零星报告供参考。孔氏优杆菌有周毛，能运动，这是其致病原理之一；粘液优杆菌其细胞壁含有肽聚糖，是革兰阳性菌细胞壁的主要成分；有报告36％～50％Crohn病的病人血清含有抗扭曲优杆菌的抗体，可能是Crohn病的病人易于招致优杆菌感染之故。近年发现宫内避孕器常引起缠结优杆菌感染。似乎优杆菌感染与其胞壁肽聚糖(peptidodycan)及表面多糖有关，它们可以刺激吞噬细胞并产生相应的细胞因子，与宿主炎症反应有关系。

微生物学检验

在《伯杰细菌鉴定手册》(1974)第八版中，优杆菌属只有28个种，到1986年《伯杰系统细菌学手册》第九版内，本属已增加到34个种，近年又有两个新增菌种共36个菌种。标本经分离分纯培养后可进一步鉴定到种。

D.乳酸杆菌属

乳酸杆菌属(Lzwtobacillus)细菌因能发酵糖类产生大量乳酸而命名，属于革兰染色阳性无芽胞厌氧杆菌(有的种为兼性厌氧或微需氧菌)。

(一)生态

致病性与免疫性

乳酸杆菌普遍被认为是生理性细菌，少数种为条件致病菌，这些种主要包括干酪乳杆菌鼠李糖亚种、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、詹氏乳杆菌、罕见唾液乳杆菌和加氏乳杆菌。它们致病的主要条件是离开原生活环境（如肠道、口腔或阴道），进入血或淋巴结甚至一些脏器中，引起感染性疾病，而在原生活环境一般认为它们是不致病的。因此对于乳酸杆菌致病性和免疫性等方面研究尚待深入地进行。

微生物学检验

标本采集后可使用MRS培养基分离培养、分纯，然后进一步鉴定属种。1986年《伯杰系统细菌手册》第二卷中本属共44种，连同亚种共51种，近年新增6个菌种，故本属共50个菌种，连同亚种共57种。

E．双岐杆菌属

人和动物体内主要生理性细菌之一是双歧杆菌属，1986年出版的《伯杰系统细菌学手册》第二卷中本属包括24个菌种，近年新增7个菌种，现共有31个菌种。

致病性与免疫性

双歧杆菌属于主要的生理性细菌，它基本上对人畜不致闰，个别可以为条件致病菌。它还是形成生物屏障、构成机体抵抗力最主要的正常菌群之一，是人畜肠道常住菌（原籍菌），参与宿主营养、免疫等重要生理作用，具有抗肿瘤、抗感染、抗衰老等生态作用，因此它们是生态制剂、保健食品等的主要添加菌类。

微生物学检验

本菌属据1986年《伯杰系统细菌鉴定手册》应包括24个种，近年又新增7个菌种共31种。

革兰染色阳性无芽胞厌氧杆菌，还有隐秘杆菌属、阿托波菌属、动弯杆菌属、假瘤胃杆菌属等菌属，本书限于篇幅就不一一介绍了。

参考文献

[1]卢青龙，其布热，王振辉，等.临床分离葡萄球菌耐药性和用药对策［J］.中国抗生素杂志，2004，29：662.

[2]俞树荣.微生物学和微生物学检测.北京：人民卫生出版社，1966，222-225.

[3]周贵民.厌氧菌血培养是值得重视的问题.中华医学检验杂志，2005，28：979-980.

[4]叶应妩.全国临床检验操作规程.江苏：东南大学出版社，1992，365-441.