电针对胰源性肺损伤保护作用机制的研究

电针对胰源性肺损伤保护作用机制的研究

齐立1聂容荣1，2（通讯作者）谭亲友3文辉2

（1解放军181中心医院神经康复科广西桂林541002）

（2桂林医学院附属医院中医科广西桂林541002）

（3桂林医学院药学部广西桂林541002）

【摘要】目的：探讨电针“天枢”穴对胰源性肺损伤保护作用机制。方法：随机选取2014年1月至2016年饲养的30只健康清洁级SD大鼠建立SD大鼠胰源性肺损伤模型。并将造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组、假手术组共三组，每组10只。以电针天枢穴治疗为电针组，以针药结合治疗（给予地塞米松的同时辅以电针干预）为假手术组，比较三组治疗效果，明确电针疗法的辅助治疗作用。三组分别留取肺组织进行肺水含量检测，免疫组织化学法检测肺组织中TNF-α与AQP-1表达情况，比较三组疗效差异。结果：AQP-1与TNF-α在正常肺组织及胰源性肺损伤肺组织中均存在表达，但在胰源性肺损伤肺组织中的表达水平显著高于正常肺组织，电针能影响AQP-1的表达。通过免疫组织化学法检测血清TNF-α和肺微血管内皮组织AQP-1含量比较为模型组>电针组>假手术组，差异具有统计学意义（P＜0.05)。结论：电针天枢穴对胰源性肺损伤可起到较好的保护作用。

【关键词】电针；胰源性肺损伤；作用机制

【中图分类号】R493【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）35-0050-02

急性肺损伤是一种失控的炎症反应[1]，以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为病理特征，是急性呼吸窘迫综合征的早期阶段，临床上表现为肺部弥漫性渗出和难以用单纯吸氧纠正的低氧血症。急性肺损伤可以看作是全身炎症反应综合征的肺部表现。在重型急性胰腺炎引起的全身炎症反应综合征中，以急性肺损伤发生率为高且出现最早[2]。肿瘤坏死因子(TNFα)与水通肺损伤道蛋白-1(AQP-1）在急性发病机制中起重要的作用。中医理论认为，肺与大肠相表里，五行皆属金。肺为娇脏，阳明腑实，大便不通，极易导致肺失宣降而致肺脏损伤。天枢穴属于足阳明胃经，为大肠的募穴，“腑病取募”，天枢穴有疏调肠腑、理气通便作用，充分发挥中医针灸学特色优势，发挥整体调节的综合作用，采用现代分子生物学方法阐明TNF-α与AQP-1在胰源性肺损伤的相互作用关系，明确电针治疗保护作用的机制，为今后加强针灸在内科急腹症中的辅助治疗工作的开展，具有重要的研究意义。

1.材料与方法

1.1实验动物与分组

随机选取30只于2014年1月至2016年6月饲养的健康清洁级SD大鼠建立胰原性肺损伤模型，均建立成功，平均体重(100～120）g,将这30只模型大鼠随机分为模型组、电针组、假手术组共三组，每组10只。

1.2建模方法

实验大鼠均分笼饲养于适宜的环境（16～25摄氏度，相对湿度50%～70%，清洁安静）术前动物禁食12h，不禁水，20g/L水合氯醛腹腔注射麻醉，动物腹部剃毛，消毒术区皮肤，无菌条件下经正中切口入腹，在十二指肠乳头对侧肠壁插入1ml小注射器针头经胰腺胆管十二指肠乳头开口入胰胆管，同时在胆管出肝门处用小动脉夹夹闭，逆行注入15g/L熊去氧胆酸钠（1ml/kg）30s注射完毕。

1.3实验方法

模型组于造模后8h剖杀[3]，提取肺组织，检测肺水含量，免疫组织化学法检测肺组织中AQP-1与TNF-α表达情况，Westernblot法检测肺组织中AQP-1蛋白的表达水平。电针组和假手术组电针双侧“天枢”穴。“天枢”穴定位采用拟人比照法，取大鼠胸腹正中线上，以剑突为一定位点，以耻骨联合上缘为另一定位点，两者连线的上2/3与下1/3的交点处旁开5mm为“天枢”穴。用特制鼠架将大鼠固定后，穴位周围剪去腹毛，皮肤常规消毒，用毫针针刺5mm深，接HANS-200A型电针仪，电流强度为0.8～1.3mA，采用疏密波，2Hz/15Hz，治疗15min后剖杀，提取肺组织，免疫组织化学法检测肺组织中TNF-αAQP-1表达情况。

1.4免疫组织化学检测方法

1）抗原的提取与纯化；2）免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；3）将显色剂与抗体结合形成标记抗体；4）标本的制备；5）免疫细胞学反应以及呈色反应；6）观察结果。

1.5统计学处理

所有数据均采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料应用平均值±标准差(x-±s)，计量资料采用t检验，计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

分析比对模型组、电针组、假手术组通过免疫组织化学法检测肺组织中AQP-1与TNF-α表达情况，Westernblot法检测肺组织中AQP-1蛋白的表达水平，结果如表1所示。

3.讨论

胰源性肺损伤发病因素多种多样，发病机制复杂，治疗手段多样化。本研究通过对比分析得出，通过免疫组织化学法检测到血清TNF-α和肺微血管内皮组织AQP-1含量结果为模型组>电针组>假手术组；此外，在肺湿/干重比结果上看，模型组>电针组>假手术组。三组差异具有统计学意义P＜0.05。这表示电针对TNF-α和AQP-1刺激有作用，可以推断出电针对于治疗胰源性肺损伤有一定的临床治疗作用。

TNF-α为体内细胞因子调节网络的启动因子，是启动炎症反应的关键细胞因子。在肺损伤炎症的发生和维持过程中占有重要地位，其具有局部促炎性反应作用，改变血管内皮细胞的通透性，增加血管渗出，刺激中性粒细胞等炎性细胞的趋化反应，从而启动炎性反应，加强单核巨噬细胞的吞噬功能，诱导前列腺素的合成等。同时促进成纤维细胞生长，刺激IL-l、IL-6、单核细胞趋化蛋白(MCP)等其他细胞因子合成释放，产生细胞因子的瀑布效应。因此，TNF-α被作为SAP发病后反映其严重程度的重要的早期指标，在ALI发病及其全身并发症发生过程中起着重要作用[8]。水通道蛋白（AQP）是90年代初被发现的，与水的快速转运密切相关的细胞膜蛋白家族[7]，现已发现11种亚型，在肺组织内分布的有AQP-1、AQP-3、AQP-4、AQP-5四种，其中肺微血管内皮细胞中AQP-1含量相对较高。AQP-1已经被证实参与了多种肺损伤性疾病的病理过程。对于水通道蛋白家族，尤其在肺微血管内皮细胞内广泛分布的AQP-1在急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用，目前陆续有人报道。已经证实AQP-1在急性胰腺炎肺损伤时表达与肺水肿的严重程度呈负相关[6]。

针灸是中华民族优秀传统文化的瑰宝，有着浓厚的文化底蕴与广泛的社会基础，同时又具有丰富的实践经验、确切的临床疗效以及完善的系统理论。针刺作用的实验研究表明，针刺可充分调动机体自身内源性自限、品质、双向调节机能，维护机体自身功能平衡。针灸通常以机械刺激、热刺激、电刺激等物理化学方式刺激人体相关腧穴，达到激发经络之气，协调阴阳，防治疾病的目的，是一种充分重视人体自身潜力激发与调动的整体调节方法。

综上所述，电针天枢穴可起到通里攻下，釜底抽薪，从而达到治阳明大肠而防治肺脏损伤的目的[5]，对胰源性肺损伤可起到较好的保护治疗作用。值得临床运用推广。

【参考文献】

[1]张圣道，雷若庆.暴发性急性胰腺炎的初步认识[J].中华肝胆外科杂志，2003，9(8):457-458.

[2]徐兴祥，钱桂生.急性肺损伤大鼠多形核白细胞L选择素表达变化及意义[J].中国病理生理杂志，2002，18(3)：269-271.

[3]丁曙晴，丁义汪，王玲.针灸治疗慢性便秘31例临床疗效分析[J].辽宁中医杂志，2007，34（6）：815-816.

[4]高振明，陈海龙，王立明，邵淑娟，刘小东，张日欣.清胰汤对大鼠急性胰腺炎肺损伤中水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响[J].中国中西医结合杂志，2007，13(5):460-462.

[5]田玉芝.胰炎合剂治疗大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤NF-κB活性的研究[J].中国中西医结合外科杂志，2007，2(13):167-71.

[6]冯珍.大黄对重症急性胰腺炎大鼠炎症因子的影响[J].中国中西医结合消化杂志，2007，2(6):380-2.

[7]王成伟，李宁，何洪波，吕建琴，刘志顺.电针双侧天枢穴对功能性便秘患者自觉症状的影响及疗效满意度评价:一项单中心、前瞻性随机对照临床试验[J].针刺研究，2010;35(5):375-379.

[8]刘学岐，刘玮.针刺治疗术后麻痹性肠梗阻疗效观察[J].中国针灸，2004;24(12):831-832.