哈尔滨市呼兰区妇幼保健院150500
摘要:目的探讨MMP-9(基质金属蛋白酶-9)在胎盘早剥患者中的表达及临床意义。方法选择胎盘早剥者82例作为观察组,根据胎盘早剥程度分为典型组(41例)和非典型组(41例),选择同期胎盘正常者40例作为对照组,用免疫组化法检测胎盘组织中MMP-9表达部位,采用蛋白免疫印迹法检测MMP-9水平。结果阳性染色细胞在所有产妇胎盘组织中均呈现,在胎盘合体滋养细胞的细胞质及细胞核中为主要表达,观察组阳性程度弱于对照组;对照组MMP-9水平显著高于其他两组,同时不典型组MMP-9水平显著高于典型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-9通过对滋养细胞的侵袭力产生影响,参与胎盘早剥的发生、发展,可以作为胎盘早剥的临床预测指标。
关键词:MMP-9;胎盘早剥;临床意义
所谓胎盘早剥,即妊娠中晚期最常见的阴道出血原因,该病起病急,进展迅速,诊断及治疗不及时,引起的孕期并发症较严重。由于该病无法预料,及早发现孕妇胎盘早剥是产科一直以来面临的难题[1],笔者通过对该院收治的82例胎盘早剥者的胎盘组织进行MMP-9(基质金属蛋白酶)检测,并与同期健康胎盘进行比较分析,以期为临床早期诊断胎盘早剥提供可靠依据。
1资料与方法
1.1一般资料选择我院2013年1月至2013年12月经阴道分娩及剖宫产术后确诊为胎盘早剥者82例,作为观察组,年龄23-34岁,平均年龄29.3±2.1;平均孕龄38.6±1.2周;根据胎盘早剥程度,分为非典型组(不典型胎盘早剥)和典型组(典型胎盘早剥),每组41例;同时选择我院同期经阴道或剖宫产术分娩的正常胎盘者40例作为对照组,年龄22-35岁,平均年龄28.9±2.2岁;平均孕龄38.3±1.1周;所有产妇均为初产妇,无原发性心脏病、高血压、胎盘早剥、糖尿病史;3组在年龄、孕龄等一般资料比较,差异均无统计学意义,(P>0.05)。
1.2方法
1.2.1标本采集所有受试者均于胎盘娩出30min内,于远离脐带附着部位,避开坏死及钙化区域,取胎盘母体组织2块;1块PBS漂洗并固定;另1块放入灭酶冻存管后快速置入液氮中,过夜后,放入冰箱保存(-80℃)。
1.2.2MMP-9表达部位检测运用免疫组化(SP)法检测,试剂盒由北京中杉金桥公司提供,严格按照说明书操作;阳性判断:胎盘组织细胞的细胞质和(或)细胞核呈现棕褐色。
1.2.3MMP-9表达水平检测运用蛋白免疫印迹法检测:取胎盘组织适量于液氮中研末,加入细胞裂解液1mL离心后取上清液。MMP-9浓度采用二辛可宁酸法检测,上清液煮沸后置于-80℃冰箱。5%浓缩胶电泳,40ug总蛋白上样量并转移至聚偏二氟乙烯膜上,放入5%脱脂牛奶枸橼酸盐缓冲液中,37℃密封1.5h,加入羊抗人MMP-9抗体、兔抗人β-actin单克隆抗体,4℃孵育并过夜,TBST洗膜3次;加入兔抗羊免疫球蛋白G二抗并37℃孵育60min,TBST洗膜3次,加入显色液,暗室显影3次;运用发光成像仪检测蛋白印迹条带灰度,MMP-9水平以MMP-9与β-actin灰度值的比值为参考。
1.3统计学处理应用SPSS19.0统计软件分析,计数资料的比较采用x2检验,计量资料采用x±s表示,组间比较采用t检验,(P<0.05)为差异有统计学意义。
2结果
2.1MMP-9表达部位阳性染色细胞在所有产妇胎盘组织均呈现,在胎盘合体滋养细胞的细胞质及细胞核中为主要表达,少量间质细胞及胎盘血管内皮细胞的细胞核内也可表达;观察组阳性程度弱于对照组。
2.2MMP-9表达水平如下表所示,对照组MMP-9表达水平为(0.93±0.06),显著高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05);同时不典型组为(0.69±0.03)显著高于典型组(0.33±0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。
3讨论胎盘早剥治疗不及时对母婴生命带来严重威胁,而处理不及时的原因是没有早期诊断造成的,由此可见早期诊断胎盘早剥的意义重大。目前临床上往往依靠B超进行诊断,漏诊误治较高,特别是胎盘附着于子宫后壁,早期症状不明显,处理的最好时机容易被错过,对母婴的伤害不可估量[2]。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在着床及胎盘的发育中,起着非常关键的作用[3]。巨噬细胞、恶性肿瘤细胞、毛细血管内皮细胞、中性粒细胞、滋养层细胞、正常细胞均可分泌MMP-9。子宫内膜受到滋养细胞侵袭时,必须穿透母体的细胞基底膜(BM)并对细胞外基质(ECM)发生降解。妊娠时母体的绒毛组织通过分泌MMP-9对子宫内膜BM进行分解,达到植入胚泡、形成胎盘的目的。本研究显示,MMP-9在所有产妇胎盘组织均呈现,在胎盘合体滋养细胞的细胞质及细胞核中为主要表达,少量间质细胞及胎盘血管内皮细胞的细胞核内也可表达;观察组阳性程度弱于对照组,提示MMP-9与滋养细胞侵袭力有关,因此与胎盘早剥相关。对照组MMP-9水平显著高于其他两组,同时不典型组MMP-9水平显著高于典型组,差异均有统计学意义(P<0.05),提示MMP-9降低,滋养细胞的侵袭力下降,发生胎盘早剥。赵晓娟等[4]通过对60例胎盘早剥者及30例健康者的胎盘进行MMP-9检测,发现,MMP-9参与胎盘早剥的过程,典型胎盘早剥组MMP-9显著低于不典型组和健康组,其结果与本结果相似。
综上所述,MMP-9对滋养细胞的侵袭产生影响,参与胎盘早剥的发生和发展,可以作为胎盘早剥的临床预测指标。
参考文献:
[1]余美佳,李俊男,王琳,等.119例胎盘早剥的I15床分析[J].实用妇产科杂志,2011,27(2):146-148.
[2]李亚珍.71例胎盘早剥诊治体会[J].山东医药,2009,49(4):84-85.
[3]武军,姬明杰,孙丽君.基质金属蛋白酶-9与妊娠期高血压疾病及胎盘早剥的关系[J].河北医药,2011,33(3):380-381.
[4]赵晓娟,宫志华,曹伟雁.基质金属蛋白酶-9在胎盘早剥中的表达及其意义[J].中华妇幼临床医学杂志,525-528.