两种方法检测乙肝病毒血清学分析与比较

两种方法检测乙肝病毒血清学分析与比较

刘海涛

刘海涛

呼和浩特市卫生局卫生监督所内蒙古自治区呼和浩特市010010

【摘要】目的：探讨使用ELISA和TRFIA两种不同方法检测乙肝病毒血清标志物的差异。方法：将某疾控中心收集的138份血清标本作乙肝两对半检测，每份血清分别使用ELISA和TRFIA两种不同方法进行检测，对得到的检测结果进行统计学分析。结果：两种方法检测HBV五种血清标志物的阳性符合率分别为：HBsAg96.08%，抗-HBs为97.50%，HBeAg为93.33%，抗-HBe为85.71%，抗-HBc为90.00%，比较发现抗-HBe和抗-HBc两种方法检测结果差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：TRFIA相较于ELISA来说检测HBV血清标志物具有特异性强、灵敏度高、无污染、可定量的优点，具有较好的使用价值，可在临床上推广使用。

【关键词】ELISA；TRFIA；乙肝两对半；血清学分析

乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒感染后引起患者以肝脏发生炎症为主的多器官损伤的综合性传染性疾病。本病具有较高的发病率，根据世界卫生组织统计，在全球范围内有3亿左右的人群呈无症状乙肝病毒携带者，在我国约有1.4亿。大多数患者病程较缓，以亚临床型和慢性为主，没有表现出明显的临床症状，仅有三分之一的患者会出现肝损伤的临床表现，如果得不到有效的治疗会转化为肝硬化或肝癌。目前临床上使用乙肝血清学标记物（HBV-M）检查是诊断HBV感染的有效手段之一，其中酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）是临床上常用的诊断方法之一[1]。据研究报道时间分辨荧光免疫分析（time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA）是具有高灵敏度无环境污染的一种定量检测HBV标志物的新检测方法。本研究选择138份临床血清标本使用ELISA和TRFIA两种进行HBV五项血清指标检测，旨在探讨两种检测方法的关系的临床应用。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取某疾控中心自2013年10月~2015年3月间收治的患者随机抽取138份静脉血进行检测，患者年龄18~69岁，平均年龄37.24±5.18岁；男性68例，女性70例。

1.2方法

空腹抽取患者静脉血5ml，3000r/min离心5~10min获得上层血清，每份血清标本分别使用ELISA和TRFIA进行HBV血清标志物检测。

ELISA：操作步骤按照试剂盒说明书进行（上海科华生物技术有限公司），酶标仪测定数据。

TRFIA：操作按照说明书进行（上海新波生物技术公司），使用配套时间分辨荧光免疫测定仪和其配套仪器进行测定。

1.3统计学方法

使用统计学软件SPSS17.0对两种方法测得的结果进行分析比较，计数资料之间使用卡方检验，以P＜0.05为差异显著，具有统计学意义。

2.结果

两种方法检测HBV五种血清标志物的阳性符合率分别为：HBsAg96.08%，抗-HBs为97.50%，HBeAg为93.33%，抗-HBe为85.71%，抗-HBc为90.00%，比较发现抗-HBe和抗-HBc两种方法检测结果差异具有统计学意义（P＜0.05），使用TRFIA法检测的阳性率显著高于ELISA，详见表1。

3.讨论

HBV-M是评估感染乙肝病毒患者病情转归的主要指标，也是评价抗病毒治疗效果的指标之一。临床上经常采用ELISA检测方法对感染人群和健康人群进行乙肝“两对半”血清标志物检查[2]。该种检测方法操作简单、经济实惠。但是这种方法存在灵敏度低、无法定量的缺点，在临床使用过程中发现还具有易传染和前带现象，没有办法对乙肝病毒感染进行动态的观察，此外，对于感染水平较低的患者也无法检查出来，只能作为最简单阴阳性结果判定[3]。TRFIA是属于特殊的荧光分析检测技术，利用荧光的波长和激发波长的差异克服普通紫外-可见光分析法中杂色光的影响，使用镧系元素作为示踪剂标记抗体或抗原，抗体和抗原发生特异性结合后复合物会在增强液中进行解离，这种情况下使用特定激发光激发出特定波长的荧光，使用时间分辨荧光仪可测定这种抗原抗体复合物中稀土离子发射出的荧光强度，从而测定待检血清样品中抗原或抗体的浓度，做到定量分析的目的[4]。

本研究结果显示，使用TRFIA测得血清样品中HBsAg、抗-HBs和HBeAg的阳性数量多于ELISA检测，但是两种方法比较差异无统计学意义（P＜0.05），而抗-HBe和抗-HBc比较差异显著（P＜0.05），这就说明TRFIA检测乙肝病毒血清标志物的灵敏度要高于传统的ELISA检测方法，这一研究结果与文献报道一致[5]。本研究使用的上海新波生物技术公司生产的TRFIA试剂盒，使用原子标记技术，使用荧光寿命较长的“铕”作为示踪物，延缓测量时间等待检测血清样品中的自然荧光完全淬灭后测示踪物的荧光信号，从根本上减少了外界非特异性荧光的干扰，从而提高检测的灵敏度，此外，镧系元素激发光和发射光的拨上间stokes位移比较大，在一定程度上能够排除干扰，提高测量的分辨率。

综上所述，TRFIA相较于ELISA来说检测HBV血清标志物具有特异性强、灵敏度高、无污染、可定量的优点，具有较好的使用价值，可在临床上推广使用。

参考文献：

[1]陈莉，李绪黎.两种方法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较[J].国际检验医学杂志，2010，31（4）：377-378.

[2]王盈，付冬琴，邓世华.两种不同方法检测乙肝病毒血清标志物的临床比较研究[J].求医问药：学术版，2012，10（6）：710-710.

[3]冯炜.两种方法检测乙肝病毒血清学标志物结果分析[J].右江民族医学院学报，2012，34（2）：198-199.

[4]孙秀明，常会忠.两种方法检测乙肝病毒血清学的结果分析[J].中国民康医学，2010，22（16）：2160-2160.

[5]舒海英.两种免疫分析方法检测乙肝病毒血清标志物的差异分析[J].陕西医学杂志，2012，41（12）：1602-1603.

作者简介：

刘海涛（1975-04），男，学士，微生物检验技师（中级），研究方向：检验技术。