蓝莓组织培养与快速繁育技术分析

蓝莓组织培养与快速繁育技术分析

孙丰

大兴安岭地区农林科学院165000

【摘要】本文以栽种于四川的蓝莓无性繁殖品系为外植体来源、对比试验为手法，测试了一系列培养基配方、植物激素种类与用量对蓝莓组织培养的影响，并最终得出结论：在蓝莓的启动与分化培养阶段，采用改进的MW培养基+适量植物激素的组合成功概率最高；生根阶段采用半营养MW培养基+NAA的组合，生根状况最佳。

【关键词】蓝莓；组织培养；对比实验

蓝莓(Blueberry)又名越橘,属于杜鹃花科乌饭属(Vaccinum)多年生落叶或常绿果树,呈灌木状生长。因为果实外表呈深蓝色，故而得名。蓝莓原产于北美，但是实际上在北半球均有分布。我国的蓝莓多生长在华东、华中及东北地区，多为海拔在400至1400米的丘陵或山地地区。其果实为蓝色近圆形浆果，单果重0.5~2.5克，最大可达3.5~5.0克。蓝莓果实具有酸甜适中、香气宜人、果核极小等优点，既可作为水果生食，又可以作为加工果汁、果酒、果干的原料。蓝莓的营养相当丰富，每百克蓝莓鲜果中含有约550毫克蛋白质、500毫克左右脂肪、大约14克碳水化合物；而维生素含量也普遍高于其他水果。蓝莓对气候、土壤的要求很低，适应能力极强，而且病虫害很少，故种植过程中一般无需考虑施用农药。同时，蓝莓果实中含有大量花青素、鞣酸等物质，对于人体细胞抗氧化、减缓衰老有很好的保健作用，故被誉为“水果之王”。本文对蓝莓茎段组织培养技术作了详细的探讨，现展示如下。

1、材料与方法

1.1蓝莓品系

本次实验采用的是日本佐贺县上场营农中心引进的南、北高丛杂交无性后代种苗中，适应四川生长环境最佳的18A、18B、18C三个品系。

1.2无菌材料的制取

将外植体表面用洗衣粉洗净，置于流水下冲洗30min，然后于超净工作台上用70%乙醇进行表面灭菌。1min后采用0.1%氯化亚汞溶液继续浸泡10min，浸泡完毕后用无菌水冲洗5次。冲洗完毕的外植体在解剖镜下去掉芽鳞，再用0.1%氯化亚汞溶液消毒4min，无菌水冲洗5次，最后将枝条切成0.5~1.0cm长的、带腋芽的茎段即可。

1.3实验方法

本次实验采取的培养基是在MS培养基和WPS培养基基础上改良的MW培养基，分别加入不同浓度的BA和NAA制成。本文的目的之一便是从上述不同植物激素配比的培养基中选出最适合蓝莓组织培养的配比。培养基制成之后，调节pH至4.0~5.0，在121摄氏度、131kPa的条件下灭菌20min。植株培养温度（24±2）摄氏度，每日光照16个小时，亮度控制在（1600±200）lx。

2结果与分析

2.1培养基与外植体形式对初始分化的影响

本节分别取MS、WPS、MW三种培养基与休眠芽、嫩芽两种外植体形式进行了六组实验。实验结果证明，使用MW培养基作培养环境、嫩芽为外植体的组合具有最高的生长分化率（~86%），而且采用新抽嫩茎作为外植体的消毒过程十分简便、污染率低，是最佳的培养基与外植体方案。

2.2激素的种类对蓝莓芽组织培养的影响

以改良的MW培养基为基础，加入不同类型、不同浓度的植物激素以及其组合（其中第一组试验是对照组，不额外添加任何植物激素），对蓝莓芽分化情况作对比。具体搭配如下表：

B组合中只添加了低浓度的生长素NAA，未添加细胞分裂素，导致只有个别南亚完成了分化，没有形成植株；C组合只添加了细胞分裂素BA，未添加生长素，也只有少量的个体完成了分化，形成的苗数量很少。D组合只添加少量细胞分裂素KT，结果和C组类似。而结合使用了细胞分裂素与生长素的E、F组合，其分化生长的状况明显更好。所以，在培养基中同时加入适量的细胞分裂素和生长素，对植株的生长分化有明显的促进作用。

2.3激素的浓度对蓝莓芽组织培养的影响

本节将蓝莓嫩芽培养瓶分为12个批次，平均分配给2个对照组：甲组6个批次全部添加浓度为0.05的NAA，然后向其中添加不等量的BA，浓度分别为0/0.1/0.3/0.5/0.8/1.0；乙组6个批次的处理方式与甲组类似，所有培养瓶中均添加浓度为0.5的BA，然后按照0/0.01/0.03/0.05/0.08/0.1的浓度梯次添加NAA。实验结果证明，两种植物激素的浓度都存在一个最佳区间，在此区间之内能有效促进蓝莓嫩芽的分化；超过此范围之外则导致促进程度不够，或者激素的生理效应由促进转为抑制。总的来说，BA浓度在0.3~0.5毫克/升、NAA浓度在0.03~0.05毫克/升之间是最适合的激素含量。

2.4生长素对蓝莓丛生芽生根的影响

无根嫩茎需要从分化培养基中转移至生根培养基，使其继续生芽生根。一般来说蓝莓外植体诱导分化之后，需要多于一周的时间才能形成幼根，20天左右形成多条须根。生长素的含量、培养基含有营养物质的数量都对蓝莓丛生芽生根有影响。本节采取对比试验方法，使用多种NAA浓度、搭配全营养/半营养的MW培养基构成若干对组合，进行测试，结果如下表：

根据对比可以发现，生根阶段，不是培养基营养越丰富，生根发苗的效果就越好；适当添加生长素能够有效提高培养生根率以及幼苗茁壮程度，这在上表中最后一行的统计中明确反映了出来。所以，在蓝莓丛生根拔苗环节，最佳的培养配比是半营养MW培养基+浓度为0.5毫克/升的NAA。

2.5移栽试管苗

当幼苗的根系发育完整、根系发达时，便可以移栽到提前备好土的营养杯之中，在营养杯条件下做好向田间移栽的准备。该环节的第一步是将营养杯的口塞打开，令自然光照射到小苗之上，在光照条件下进行抗性训练。移栽时要注意需要将沾在根上的培养基彻底洗净，不要残留。营养杯应当用透明罩盖一周左右，给小苗一个适应自然环境的时间。若培养出来的小苗不够茁壮，可以考虑适当延长遮盖时间。移去透明罩后，将营养杯置于阴凉通风之处，每天喷水2次，持续10天左右，直至缓苗期顺利度过。此时小苗应当进入挺拔茁壮生长的时间段，部分生命力旺盛的个体已经长出新叶，此时便可以移栽到田间，进行正常的管理即可。

3、结论

以蓝莓嫩茎做外植体，改进的MW培养基+0.05NAA+0.5BA做启动培养基、分化培养基，半营养MW培养基+0.5NAA做生根培养基的组合最适合蓝莓的组织培养。

参考文献

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