黄杨宁片中环维黄杨星D的提取方法探讨

黄杨宁片中环维黄杨星D的提取方法探讨

黄金亮1

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海正药业（杭州）有限公司浙江杭州311404

【摘要】目的：探讨黄杨宁片中环维黄杨星Ｄ的有效提取途径。方法：采用文献法和优化法提取，将得到的环维黄杨星Ｄ与异氰酸苯酯反应后，用HPLC定量测定比较提取效果。文献法为，使用0.5%冰醋酸加热超声提取，提取液调节pH，再用三氯甲烷萃取得到环维黄杨星Ｄ。优化法为，先用氨试液润湿样品粉末，加三氯甲烷搅拌提取环维黄杨星Ｄ。结果：文献法测定含量为80.7%，优化法为83.8%。优化法重复性试验RSD2.3%；加样回收率平均值96.9%，RSD1.7%。结论：优化法较文献法操作更简单，提取率更高，重复性好。

【关键词】黄杨宁片，环维黄杨星Ｄ，高效液相色谱法

黄杨宁片中主要成分为环维黄杨星Ｄ，近年来发现中国药典标准［1］所采用的用酸性染料比色法测定的是片剂中的总生物碱，不能真实反映片剂中环维黄杨星D含量。本文参考文献［2］来优化黄杨宁片中的提取方法，以异氰酸苯酯为衍生化试剂，用HPLC方法测定环维黄杨星D的含量。

1.仪器与试药

Waters2695HPLC；TGL-18G0-C高速台式离心机；ME235S分析天平，Millipore超纯水机。环维黄杨星D对照品（中国药品生物制品检定所，批号110888-200703），黄杨宁片（江苏苏中药业集团股份有限公司，规格：1mg/片，批号170302，170303，170304），甲醇（Fisher，色谱纯），异氰酸苯酯（Sigma，分析纯），水为去离子水，其它试剂均为分析纯。

2.方法与结果

2.1色谱条件色谱柱为WatersXBridgeC18柱（150mm×4.6mm）；流动相为甲醇-水

（83∶17）；流速1.0ml·min-1；检测波长242nm；柱温为30℃；进样量20μl。

2.2衍生化试剂的配制精密吸取异氰酸苯酯20μl，加三氯甲烷稀释至10ml，摇匀。

2.3对照品溶液的制备精密称取环维黄杨星D对照品10mg置量瓶中，加三氯甲烷稀释至25ml，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.4供试品溶液的制备

2.4.1文献法（文献［2］报道的方法）取本品研细的粉末，精密称取适量（约相当于环维黄杨星D10mg），置具塞锥形瓶中，加0.5％冰醋酸溶液40ml，50℃加热超声2h，取出，放冷，离心6min（3000r/min），取上清液，残渣加适量0.5％冰醋酸溶液充分洗涤，离心6min（3000r/min），合并上清液及洗液，用氨水调pH值至9.0，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷50ml振摇2min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷层，用三氯甲烷湿润的试纸滤入圆底烧瓶中，再用三氯甲烷萃取3次（40，30，30ml），分取三氯甲烷层，依次滤入25ml量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4.2优化法（优化文献［2］方法）取本品研细的粉末，精密称取适量（约相当于环维黄杨星D10mg），置试管底部，加氨试液2-4滴润湿粉末并放置2min，搅拌使之附着于试管底部的试管壁。加三氯甲烷5ml，用玻璃棒沿试管壁搅拌约3min，转移三氯甲烷上清液至25ml量瓶中，再重复以上操作3次，将提取液合并至同一量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.53批样品含量测定结果取3批样品（批号分别为170302、170303、170304），按上述两种方法进行供试品溶液制备，并测定含量。文献法测定三批含量分别为80.7%、79.8%、81.5%，均值为80.7%；优化法测定三批含量分别为84.2%、83.3%、83.9%，均值为83.8%。试验表明优化法提取效果最好。

2.6优化法重复性和供试品溶液稳定性实验称取同一批号样品6份分别照优化法制备，并测定含量，结果RSD＝2.3％，重复性良好。取其中一份供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，18小时测定含量，结果RSD＝0.8％，供试品溶液在18h内稳定。

2.7优化法加样回收率试验精密称取同一批黄杨宁片细粉6份适量，各加入等量的环维黄杨星D对照品，按优化法配制并测定含量，计算得回收率平均值为96.9%，RSD＝1.7％。

3.讨论

3.1药典方法（酸性染料比色法）测定片剂含量，测定的物质为主含环维黄杨星D的总碱，包含了一定量结构相似的其他生物碱，专属性差。文献[3]直接用HPLC紫外检测器在低波长下测定环维黄杨星D的含量时，由于环维黄杨星D结构不含双键，紫外吸收很弱，不利于检测。本文使用异氰酸苯酯为衍生化试剂，柱前衍生化测定环维黄杨星D含量，能够较简便，真实有效的对主物质环维黄杨星D定量。

3.2文献报道多种黄杨宁片中环维黄杨星D的提取方法，多数过程较为复杂。本文比较了2种供试品溶液的制备方法，实验表明优化法能够有效简化操作，提取率高，更适合生产企业用于该产品的质量控制。

参考文献：

[1]ChP（中国药典），2015.VolI（一部）：1472.

[2]刘小东，沈晓霞。衍生化反相高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量。时针国医国药，2008，19（9）：2334-2335。

[3]许新军，张正行，盛龙生，等。HPLC/MS法与柱前衍生化HPLC/UV法测定环维黄杨星D有关物质比较。中国药科大学学报，2002，33（5）：408-411.