降钙素基因相关肽对胎鼠高氧肺损伤后肺泡II型上皮细胞的影响

降钙素基因相关肽对胎鼠高氧肺损伤后肺泡II型上皮细胞的影响

姜佳玲1白玉新2朱华2

1.内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014000；2.内蒙古自治区人民医院内蒙古呼和浩特010017

【摘要】目的研究降钙素基因相关肽对胎鼠高氧肺损伤后肺泡II型上皮细胞的影响。方法对已经鉴定过的肺泡II型上皮细胞进行高氧干预后，将其进行随机分为6组：A组：空气组；B组：高氧组；C组：高氧+CGRP组；D组：高氧+CGRP+CGRP受体拮抗剂CGRP8-37；其中空气组暴露于210mL/L氧气中，高氧组均暴露于950mL/L氧气中。各组均培养24h后，光镜下观察其增殖状况；CounterStar细胞计数仪分别对培养12h、18h及24h的各组细胞进行计数；CCK8检测法测定每组细胞的存活率。结果与空气对照组相比较发现，高氧组细胞存活率呈现出明显下降的趋势。而降钙素基因相关肽干预之后细胞的存活率显著加强的形势。结论降钙素基因相关肽能够对高氧肺损伤后的肺泡II型上皮细胞有保护作用。

【关键词】降钙素基因相关肽（CGRP）；肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ)；肺损伤

吸氧是临床上抢救早产儿及极低体重新生儿最基本、也是最有效的手段，随着人们生活水平的不断提高及国家医疗条件的改善，越来越多的早产儿及极低体重新生儿给予了呼吸支持治疗，这样使得早产儿的存活率显著提高，但是长时间、高浓度的吸氧（＞90%）则会导致慢性肺疾病及支气管肺发育不良[1]，高氧所导致的肺部损伤主要是发生氧化应激反应之后，大量的氧自由基释放，超过细胞的承受量之后引起炎症反应，又因为细胞修复异常以及基因的过度表达，最终造成细胞坏死甚至死亡[2]。降钙素基因相关肽(CGRP)属于一种特殊的神经递质，来源于人和哺乳动物的感觉神经C纤维末梢，主要是由37个氨基酸残基构成的多肽，其作用主要是影响血管收缩以及诱发神经源性炎症反应。截止到目前为止有相关研究已经发现CGRP分布在人体的很多组织中，主要起到组织修复以及抗炎症反应，并对IL-8以及ROS的生成产生一定的抑制作用，除此之外还能够对多种细胞的增殖分化产生影响，同时参与到胚胎发育过程中，保护刺激肺泡上皮细胞。但是降钙素基因相关肽对于高氧诱导的肺泡二型上皮细胞的损伤是否具有保护作用还需要进行更加深入的研究分析[3]。

1材料与方法

1.1实验材料经原代培养的孕18天的SD大鼠肺泡II型上皮细胞

1.2主要试剂及仪器DMEM/F-12培养基、澳洲胎牛血清、胰蛋白酶均来自美国Gibco公司；Calcitoningene-relatedpeptide(CGRP)、CGRP8-37均来自Abcom公司；CCK8试剂盒（上海市碧海云天生物有限公司）；ITACHI一600透射电镜（日本日立公司）；低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；倒置显微镜（OLYMPUS，日本）；照像系统（OLYMPUS，日本）。

2结果

2.1各组细胞形态变化显微镜下观察正常细胞会发现，一天以后细胞出现贴壁现象，且呈岛状。还会看到明显的细胞核、核仁以及一些颗粒。而高氧处理后其细胞数目较空气组明显减少，胞内颗粒状物质减少，胞核略缩小，细胞轮廓变稍长(图2B)。而高氧+CGRP处理后其细胞数目较高氧组略有增加，胞内颗粒状物质减少有所改善，胞核缩小不明显，细胞轮廓变化较高氧组略轻（图2C)。而高氧+CGRP+CGRP8-37组与高氧+CGRP组比较，细胞数目较之略少，胞内颗粒物质有所减少，胞核变化不明显

3讨论

急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合症(ARDS)因肺部炎症反应而引起肺部阻塞、缺氧及其他并发症而严重威胁患者生存质量。尤其是ALI大大提高了患儿的发病率和死亡率以及住院费用。目前临床上有通过限制最大潮气量和气压的机械通气来尽量减少肺损伤的发生，虽然可以给肺组织提供足够的氧，但同时也会造成肺泡损伤引起再次炎症反应从而使肺泡再次塌陷。因此目前虽采用了保护性机械通气策略，但ALI的发病率仍然没有下降，其行之有效的减少肺损伤的方法仍需进一步的探索。

CGRP在肺的病理、生理过程中发挥着十分重要的作用，它属于一种感觉神经肽，主要由两种细胞释放，感觉神经末梢和神经内分泌细胞，一共包含37个氨基酸残基，在肺部含量丰富（其中包括了CGRP的受体）[4]。之前的研究表示CGRP在神经源性炎症机制中起介导作用，它可以使血管扩张属于扩血管物质，但是最近的研究表示它还有抗氧化损伤的作用[5]。MonneretG等研究发现，中性粒细胞和单核细胞的趋化能力可以被外源性CGRP抑制，同时外源性CGRP还会抑制内毒素引起的的炎症放大反应，所以外源性CGRP也可以被当作内源性的抗炎因子[6]。

根据研究结果可知，和高氧组进行比较，将CGRP加入到高氧组细胞培养液后AECⅡ凋亡率下降。若使用CGRP8-37（受体拮抗剂）来阻断结合过程，则所有保护作用降低。经上可知，CGRP除了可以维持生理功能外还对AECⅡ的氧化损伤有保护作用。

参考文献：

[1]NunesC，PereiraI，AraújoC，etal.Fetalbronchopulmonarymalformations[J].MaternFetalNeonatalMed，2015，Nov；28(16)：1996-2000.

[2]Gordo-VidalF，Calvo-HerranzE，Abella-AlvarezA，etal.Hyperoxia-inducedpulmonarytoxicity[J].MedIntensiva，2010，34：134-138.

[3]BoHuang，QingLi，ShuhongXu，etal.SubstancePprotectsagainsthyperoxic-inducedlung