ALOX5AP基因位点rs556621及HDAC9基因位点rs11984041与LAA型脑梗死发病的相关性研究

ALOX5AP基因位点rs556621及HDAC9基因位点rs11984041与LAA型脑梗死发病的相关性研究

刘佳1尹佳琦2

刘佳1尹佳琦2

（1新疆自治区中医医院脑病科830000）

（2新疆自治区中医医院急诊科830000）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）24-0129-02

1.前言

脑卒中目前是世界上三大致死性疾病其中一个，在中国每年有约7百万的患者诊断为脑卒中，其死亡率是心肌梗死的4-6倍。世界卫生组织数据提示，在美国及部分欧洲国家的卒中发病率下降的同时，中国脑卒中的年发生率正以每年8.7%的速度上升，目前此数据比美国高出一倍［1］。

2.资料和方法

2.1研究对象

根据国际疾病分类第九版制定的脑梗死诊断标准，符合TOAST[2]分型中大动脉粥样硬化型脑梗死的诊断标准，收集自2014年3月止2014年12月期间在新疆自治区中医医院神经内科就诊的蒙古族及汉族患者。

收集自2014年3月止2014年12月期间，从新疆自治区中医医院健康管理中心体检者中招募正常对照者。选取性别、年龄、种族、吸烟史及饮酒史与患者相对应的625例正常对照者。

2.2研究方法

2.2.1.基因组DNA的提取：受检者空腹12小时以上，于EDTA抗凝负压管内收集5ml外周血后静脉抽血5ml，以低渗溶解红细胞方法，经SDS裂解白细胞，蛋白酶K消化，饱和酚抽提及乙醇沉淀等多步奏提取基因组DNA。

2.2.2.PCR体外基因扩增：采用PCR扩增含ALOX5AP基因位点rs556621及HDAC9基因位点rs11984041的DNA片段。利用NCBIGeneBank数据库查询ALOX5AP基因及HDAC9基因标准序列(http//www.ncbi.nlm.nih.Gov/Genebank/Gen-bankOveriew.hlm)。使用在线免费软件Primer3.0(version0.4.0,http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)进行ALOX5AP基因位点rs556621及HDAC9基因位点rs11984041全部编码区的引物设计，扩增产物需包含ALOX5AP基因及HDAC9基因全部编码区序列。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以上两种基因编码区引物核苷酸序列如下表1。

表1ALOX5AP基因及HDAC9基因引物序列

图1PCR扩增条件

2.2.4统计学分析

分类资料使用卡方检验，患者与健康对照组的连续资料使用T检验，见表3。患者与健康对照组的Hardy-Weinberg平衡使用卡方拟合优度检验。患者与健康对照组的基因型及等位基因使用皮尔森卡方检验。统计方法采用双向，P<0.05认为有效。全部资料的统计使用SPSS18.0软件。

3.结果

3.1结合表4提示结果，参与检测的新疆蒙古族及汉族患者及健康对照均经过H-W平衡验证。由表3得出，在共显性模型中，蒙古族的LAA患者及健康对照的rs556621的基因型及等位基因之间有明显不同，(χ2=6.188,P=0.038基因型;χ2=4.177,P=0.030等位基因)，同时在显性模型中得出同样结果(χ2=8.295,P=0.018)。

3.2由表3可以得出，在共显性模型中发现，汉族的LAA患者及健康对照的rs556621的基因型及等位基因之间均无显著差异，(χ2=0.572,P=1.041基因型;χ2=0.006,P=0.843等位基因),同时在显性模型及隐性模型中得出同样结果(χ2=0.681,P=0.210显性；χ2=0.091,P=0.725隐性)。

3.3此外，基因位点11984041在蒙古族及汉族人群中均未发现显著差异，这一点同SNP库中对亚洲人群基因位点rs11984041研究的结果一致。

4.讨论

针对脑梗死的遗传因素的研究，目前人类基因组计划和单体型图的研究提供了一个研究契机，可以从基因组角度研究脑梗死的遗传结构[3]。

通过GWAS文章的阳性结果，本研究选定此位点进行研究。位点rs556621位于ALOX5AP基因序列的小片段中，ALOX5AP基因全长31Kb，有5个外显子和4个内含子。脂肪氧和酶激活蛋白5/5-脂氧合酶通路是氧化应激反应中重要的信号转化通路，而AL0X5AP基因编码的FLAP是在这个通路中起着很重要作用的关键酶。

目前根据大量文献结果，我们考虑rs556621的A等位基因可能是脑梗死的易感等位基因，我们选择位于中国卒中带上，处于中国西北部作为脑血管病高发区的新疆地区蒙古族及汉族人群进行研究。

蒙古族就种族方面可能与欧洲有一定的相似，这与中国人的腔隙性梗死发病率高于白种人，而LAA型脑梗死的发病率低于白种人是一致的。种族和生活习惯的差异可能是造成这种差异的主要原因。

所以，我们考虑ALOX5AP基因位点rs556621的多态性和蒙古族大动脉粥样硬化性脑梗死的发病具有相关性，但是与汉族患者无明显相关性，可能是由于不同的遗传背景造成的。

位点rs11984041的单核苷酸多态性,其位于组蛋白去乙酰化酶9抗体(HDAC9)基因内显子区的终末端，其与大动脉粥样硬化性脑梗死的关系已经有所报道。本研究结果显示在蒙古族及汉族人群中，HDAC9基因位点rs11984041与LAA型脑梗死发病无相关性（表4），可能是由于不同的遗传背景以及不同种族之间基因功能多态性的分布造成的。

5.结论

在新疆蒙古族人群中，ALOX5AP基因位点rs556621的变异是引起LAA型脑梗死发病的重要遗传因素。需要更多具有更大样本量需要针对LAA型脑梗死的病理生理过程进行相关基因功能性的研究，以进一步明确基因位点变异的潜在影响。

【参考文献】

[1]GaoX,YangH,ZhiPingT:Associationstudiesofgeneticpolymorphism,environmentalfactorsandtheirinteractioninischemicstroke.NeurosciLett,2006;398:172-177.

[2]AdamsHPJr1,BendixenBH,KappelleLJ,BillerJ,LoveBB,GordonDL,MarshEE3rd.Classificationofsubtypeofacuteischemicstroke.Definitionsforuseinamulticenterclinicaltrial.TOAST.TrialofOrg10172inAcuteStrokeTreatment.Stroke1993;24:35-41.

[3]LeeJD1,LeeTH,HuangYC,ChangYJ,ChangCH,HsuHL,LinYH,WuCY,LeeM,HuangYC,RyuSJ,HsiaoKM.ALOX5APgeneticvariantsandriskofatherothromboticstrokeintheTaiwanesepopulation.JClinNeurosci.2011;18:1634-638.