益母草的提取工艺研究

益母草的提取工艺研究

张学谦于丽娜

张学谦于丽娜（沈阳市苏家屯区中医医院药剂科110101）

【摘要】目的:对益母草中的总黄酮进行提取工艺研究。方法:通过正交实验确定提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件。以提取溶剂水和益母草的重量倍数比，提取煎煮时间和提取煎煮的次数作为正交实验设计的三个考察因素，以益母草提取物中的总黄酮含量为考察指标，每个因素选用三个水平进行实验。结果:提取溶剂水和益母草的重量倍数比为10，提取煎煮时间为三小时，提取煎煮3次。结论:该方法操作简单、方便，可作为对益母草中总黄酮物质提取的方法，为益母草总黄酮提取工艺的进一步深入研究提供了依据。

【关键词】益母草总黄酮提取工艺正交试验

【中图分类号】R284【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）12-0030-02

益母草为唇形科益母草植物LeonurusjaponicusHoutt.的新鲜或干燥地上部分[1]。其味辛、微苦，性微寒，入心包肝经。具有活血调经，利尿消肿之功效。用于治疗月经不调、痛经、水肿尿少、急性肾炎水肿等疾病。益母草全草含生物碱、黄酮、酚类、氨基酸、有机酸、糖类。其中，黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性。药理研究证明其具有调经止血，保护心肌缺血再灌注损伤抗血小板聚集，降低血液粘度等作用。在临床上可用来治疗痛经、流产后出血、冠心病、心肌缺血、高黏血症、肾炎水肿、风湿关节疼痛等疾病，具有广泛的药理活性[2]。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其他包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等[3]。黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心脑血管疾病、消炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[4]。益母草分布广泛，益母草中含有较为丰富的黄酮[5]～[8]。因此，益母草具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。

1仪器与材料

1.1仪器

UV-755B紫外线分光光度计(上海分析仪器总厂)；DZF-150小型真空恒温干燥箱(郑州长城科工贸易有限公司)；80-2离心沉淀器(上海分析器械厂)；旋转蒸发器（上海申生科技公司）；KDM型控温电热套（耶城华鲁电热仪器有限公司）。

1.2材料

益母草(经鉴定为唇形科益母草植物LeonurusjaponicusHoutt.的干燥地上部分)。95%乙醇AR；亚硝酸钠CP；硝酸铝CP；正丁醇CP；氢氧化钠CP；芦丁标准品(中国生物制品检定所)。

2实验方法和结果

2.1工艺的设计

根据预试验的考察结果，我们对水提取益母草药材中有效成分的影响因素进行了评估，从而确定以提取溶剂水和益母草的重量倍数比，提取煎煮时间和提取煎煮的次数作为正交实验设计的三个考察因素，以益母草提取物中的总黄酮含量为考察指标，每个因素选用三个水平（见表1），按照正交实验设计表L9（34）的安排进行实验。

表1因素水平表

ABCD

水平料液比（倍）煎煮时间（h）煎煮次数空白

1611

2822

31033

2.2操作步骤

2.2.1样品的制备

依据正交设计实验安排表，取益母草药材适当粉碎，取益母草粗粉约10g，称定，放人已编号的圆底烧瓶中，加水适量，回流，再冷却、过滤，滤液旋转真空浓缩(80℃，68.0rpm)至一定体积。待滤液冷却后，加入等体积95%乙醇，再放入冰箱内冷藏，过滤得滤液，弃去滤渣。滤液旋转真空浓缩(80℃，68.0rpm)至乙醇蒸发完全，将流浸膏置于真空干燥箱中干燥成疏松固体，粉碎得终产物。

2.2.2总黄酮的含量测定

对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品200mg，置于100ml容量瓶中，加入95%乙醇溶液并稀释至刻度，摇匀。精密称取10ml置于100ml容量瓶中，加入95%乙醇使成100ml，摇匀即得(每1ml含有无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml分置于50ml容量瓶中，各加95%乙醇12ml，加10%亚硝酸钠溶液2.0ml，混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝2.0ml，放置6分钟加5%氢氧化钠试液20ml，最后用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，以第一瓶为空白溶液，用紫外分光光度计，在500nm处测定吸光度。得一回归方程：A=10.33C-0.0116，r=0.9996(n=6)。

2.2.3提取物中总黄酮含量的测定

精密称定提取物，置索氏提取器中，加95%乙醇回流至无色，将提取液置于烧杯中，沸水浴加热浓缩至干，再用热水洗涤3次。将洗液滤至分液漏斗中，并加入饱和正丁醇液萃取3次。合并萃取液于小烧杯中，沸水浴蒸干，再加95%乙醇至使之溶解，并移于50ml容量瓶中，再加95%乙醇至刻度，摇匀。精密取10ml于50ml容量瓶中加95%乙醇至刻度摇匀，按标准曲线的制备操作测定吸光度，计算样品中总黄酮的含量。

2.3结果

试验安排及结果见表2，方差分析见表3。通过正交实验设计及结果分析，可以看出，本实验提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件为：A3＞C3＞B3，即提取溶剂水和益母草的重量倍数比为10，提取煎煮时间为三小时，提取煎煮3次。

表2试验安排和结果

3讨论

从本文实验结果看出提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件中，提取溶剂水与益母草的重量倍数比和提取次数较关键，可能是因为水提取过程中药材的浸润过程需要耗费大量的溶剂，这样才可以使得药材中的水溶性成分充分的被溶剂浸润、溶解、置换出来；提取次数的要求说明药材在提取过程中浓度梯度的作用是很明显的；而充分的煎煮时间也是水提取药材有效成分的不可忽略的条件。

益母草是一种常见的活血化瘀药,《本草纲目》中称之为“血家之圣药”,被视为治疗妇科疾病的良药。现代药理学研究表明它有着广泛的生物学活性,能够治疗多种疾病,有广阔的应用前景。

4结论

本文实验结果表明，利用本文所提供的提取方法操作简单方便，是提取黄酮类物质的便捷途径，对益母草的工艺研究和生产应用具有一定的参考价值。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(1部)[M].北京:化学工业出版社，2005.

[2]阮金兰，杜俊蓉，曾庆忠，等.益母草的化学、药理和临床研究进展[J].中草药，2003，34(11):15-19.

[3]韩公羽，沈企华.植物药有效成分的研究与开发[M].杭州:杭州大学出版社，1991.

[4]姚小敏，覃成箭，羊金梅，等.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报，2005，27(6):779-781.

[5]黄锁义，黎海妮，余美料，等.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药，2005，16(5):398-399.

[6]夏杏洲，张辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究[J].食品研究与开发，2002，23(5):35-37.

[7]李冬菊，林阳.山楂叶黄酮的提取及其鉴别[J].辽宁中医杂志，2003，30(7):578-579.

[8]魏永生，王永宁，石玉平，等.分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究[J].青海大学学报(自然科学版)，2003，21(3):61-63.