高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点

高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点

王磊刘远

（天津科技大学天津300222）

【摘要】药品安全与人们的生命健康密切相关，因此，加强药品测定方法的研究，对确保药品安全意义重大。药品测定中高效液相色谱法（HPLC）在测定药品有关物质时具有较高精准度，优点突出，被广泛应用在药品物质测定中。本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。

【关键词】高效液相色谱法；药品；有关物质；测定

【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）16-0322-01

药品中的相关物质主要指药物生产、贮存环节引入的有机杂质，不仅给药物纯度造成较大影响，而且影响药物疗效的正常发挥，甚至引起不良反应。HPLC在当前药品中有关物质测定中应用广泛，如何把握测定操作中的要点，提高测定结果准确性，受到越来越多业内人士的关注。

1.溶液配制及系统适用性试验

1.1配制溶液

如使用自身对照法进行测定，应分别配制两份对照溶液、供试品溶液，均需进行两次进样。当需进行复验、产生边缘数据或采用外标法时在分别配制两份的同时，至少各进行三次进样。另外，使用外标法时，还需对其中一份溶液进行五次连续进样。

1.2系统适用性试验

系统适用性是否满足规范要求直接影响药品有关物质测定结果准确性，其中拖尾因子、重复性、分离度是系统适用性试验中的重要参数，应引起足够的重视。

首先，使用反相高效液相色谱法测定药品中有关物质时，借助峰面积实现，通常对拖尾因子不做要求，而如果出现严重的拖尾现象，会给测量峰面积以及分离效果造成不利影响，甚至会包含杂质，严重影响测定结果准确性，因此，应注重对拖尾因子严加控制。其次，重复性。当杂质含量不足0.5%时，要求峰面积相对标准差不能达到10%；当含有0.5%～2%的杂质时峰面积相对标准差不能达到5%。当杂质含量超过2%时，峰面积相对标准差应控制在2%以下。当使用外标法时要求对照溶液进行连续五次的进样，要求峰面积相对标准差不能超过2%。

2.操作测定操作先关参数控制

为保证HPLC测定药品有关物质质量，测定操作时应严格控制相关参数，其中确保溶剂峰、色谱图记录时间、检测灵敏度、积分参数等参数质量至关重要。

首先，溶剂峰指对照品、溶解供试所用的等体积溶剂的色谱峰。操作过程中应确保基线平稳后，再放入溶剂，并且通常需要进行两次进样。其次，色谱图记录时间有两种处理方式：（1）参考不同品种项下的时间，即，保证溶剂色谱图、供试品溶液、对照溶液记录时间相同，是主成分峰保留时间的n倍。（2）品种项下并未进行规定，此时应保证对照溶液色谱图记录到主成分峰完全检出，不过仍应保证溶剂色谱图记录时间、供试品溶液具有一致的记录时间，为主成分色谱峰保留时间的两倍。再次，保证检测灵敏度符合要求。高效液相色谱仪数据处理系统包括色谱工作站、积分仪，其中如为积分仪，记录仪具有固定的满量程，对色谱峰高进行调节，使其达到记录仪满量程的预定范围，并可对检测器的灵敏度进行调节。当为色谱工作站时可对记录仪的量程进行调节，量程的调节和检测器的灵敏度不太相关，仅借助调节峰高的量程指示，对图谱进行放大，实现对供试液中的杂质峰加以清晰分辨。同时，判断基线是否垂直、积分合理与否。如发现不合理可采用手动积分方式进行重新积。调节量程时应注意，当对照液主峰约60mv高时应使主成分色谱峰的峰高达到满量程的20%，对容积色谱图、供试液、対照液进行打印时纵坐标应均为300mv。最后，积分参数。对供试品溶液色谱峰最小积分参数进行确定时应注意，要求紫外-可见光检测器基线噪声最大为5×10-4AU，其中将信噪比为3的浓度作为检测限，此时可对峰高15×10-4AU最最小峰高值做积分处理。当杂质限度不足0.2%时，可设小最小峰高值，不过受不同杂质峰扩展程度影响，采用此种处理方法会产生误差。另外，可逐步稀释对照溶液，通过系列溶液的配制对色谱系统的检测限加以确定，并在对照溶液、供试品溶液相同标尺下对色谱图进行记录，将信噪比3:1对应浓度当做检出限。

3.计算

运用HPLC测定药品有关物质时，计算是极其重要的一个环节，此时应注意杂质限量处理以及杂质峰面积的取舍。一方面，处理杂质限量时，运用自身对照法当杂质峰面积不能超过对照溶液主峰面积时，无需计算便可直接进行比较。当杂质峰面积不能超过对照溶液主峰面积的1.5倍时进行计算，禁止应用供试品溶液的主峰面积，原因在于当浓度相差较大时，峰面积和主峰并为线性关系，因此，应比较对照溶液峰面积。当使用外标法时，当要求以峰面积进行计算，并且含量最大为标示量的0.5%时，杂质对照品溶液配制浓度应和杂质限度相近。另一方面，取舍杂质峰面积时，应先去除杂质峰，将计算保留时间一致的杂质峰加以保留，计算三份峰面积相对标准差，计算在规定范围中杂质峰面积的平均值。当其中一份在另两份相应保留时间无峰时，当确定为杂质峰时，在允许误差范围内，将此值去除，计算另两份的平均值。

4.结论

随着人们安全意识的不断提高，药品安全受到国家职能部门及社会的关注，其中药品测定是确保药品质量的重要手段，尤其HPLC是药品相关物质常用检测方法。本文对其在药品测定中的操作进行研究，得出以下结论：

4.1使用HPLC测定药品有关物质时，应严格依据相关规范做好溶液配制以及系统适用性试验，为确保药品相关物质测定结果的准确性垫底基础。

4.2在对药品有关物质进行测定时，应注重操作细节，确保溶剂峰、色谱图记录时间、检测灵敏度、积分参数等参数满足规范标准要求。另外，在对测定结果进行计算时，还应根据具体情况具体分析，提高测定结果计算精度。

【参考文献】

[1]刘虹,陈燕,赵海鹏.高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点[J].中国医药指南,2015,14:293.

[2]杨远高.高效液相色谱法在几种中草药中的应用研究[D].西南大学,2013.