超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和糖精钠的含量

超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和糖精钠的含量

钟锐文

广州市澳键丰泽生物科技有限公司广东广州510760

摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。

关键词：超高效液相；糕点；苯甲酸（钠）；山梨酸（钾）；糖精钠

SimultaneousDeterminationofBenzoicAcid（Sodium），SorbicAcid（Potassium），andSaccharinSodiuminCakesbyUltraPerformanceLiquidChromatography

RuiwenZhong

（GuangzhouAlchemyBiotechnologyCo.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong510760，China）

Abstract：Thebenzoicacid（sodium），sorbicacid（potassium），dehydroaceticacid（sodium），acesulfamepotassium，andsodiumsaccharininthecakeareextractedwithwater，delipidated，precipitatedprotein，centrifuged，andfiltered，followedbyultra-highperformanceliquidchromatography.Theaveragerecoveriesofthestandardsampleswere99.01%~99.36%，99.51%~101.58%，and98.90%~99.73%，respectively.

Keywords：Ultrahighperformanceliquidphase；Pastry；Benzoicacid（sodium）；Sorbicacid（potassium）；Sodiumsaccharin

食品安全是当今关系民生的重大问题，直接关系到广大人民群众的身体健康，而食品的色香味取决于在食品加工过程中使用的适量的食品添加剂。根据国家标准对食品的添加剂定义是：为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐、保鲜和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质。食品用香料、胶基糖果中基础剂物质、食品工业用加工助剂也包括在内。[1]糕点，作为人们喜爱的食品，其中添加剂主要有苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）、糖精钠等。其中苯甲酸（钠）由于其毒性较大，现已有明文规定不得添加进糕点中，山梨酸（钾）与糖精钠也只能限量添加。国内对三类物质的限量检测，多以高效液相色谱法，气相色谱法。本方法探讨了超高效液相法测定上述三种添加剂，相较传统的高效液相色谱法更为简便快速、准确和回收率高。

1.实验部分

1.1仪器试剂

WatersACQUITYUPLCH-CLASS超高效液相色谱（四元溶剂管理器、二极管阵列检测器）美国沃特世；AL204电子天平瑞士梅特勒托利多；涡旋振荡器；高速离心机安徽中科中佳；超声波发生器昆山超声仪有限公司。

苯甲酸标准溶液（1.0mg/ml）：中国计量科学研究院研制，GBW（E）100006。山梨酸标准溶液（1.0mg/ml）：中国计量科学研究院研制，GBW（E）100007。糖精钠标准溶液（1.0mg/ml）：中国计量科学研究院研制，GBW（E）100008。氨水溶液（1+99）：取氨水1mL，加到99mL水中，混匀。亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。乙酸锌溶液（183g/L）：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。乙酸铵溶液（20mmol/L）：称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000mL，经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。

1.2试样制备[2]

准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加正己烷10mL，于60℃水浴加热约5min，并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）25mL，乙醇1mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，弃去有机相，水相转移至50mL容量瓶中，残渣加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜，待超高效液相色谱测定。

1.3超高效液相色谱条件

色谱柱：WatersACQUITYUPLCBEHC181.7µm2.1x150mm；柱温：30℃；流动相：甲醇+乙酸铵溶液（20mmol/L）；流速：0.21ml/min，等度洗脱；检测器：二极管整列检测器（PDA）；检测波长：230nm；进样量：1mL。

1.4标曲配置

配置浓度5、10、25、50、80、100g/ml的苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准液进样1L，按1.3色谱条件进行检测，三种物质以保留时间和峰面积对浓度分别进行线性回归。

2.结果与讨论

2.1色谱分离效果

图1.混合标准溶液色谱图

Fig.6Mixedstandardsolutionchromatogram

按1.3的色谱条件对混合标品进样，得到标准溶液色谱图。

2.2方法的线性范围跟检出限

线性：根据1.4操作，三种物质在5~100g/ml浓度范围内线性良好，其线性回归方程见表1。检出限：5.0g空白样品，按1.2操作后进样。依据3倍噪声作为检出限，对照浓度最低标品峰面积，得出近似浓度，配置0.15g/ml的苯甲酸标准溶液，0.10g/ml的山梨酸标准溶液，0.15g/ml的糖精钠标准溶液进样，计算得出该方法苯甲酸、山梨酸、糖精钠检测限见表1。

表13种食品添加剂的线性回归方程、相关系数跟检测限

Tab.1Linearregressionequation，correlationcoefficientanddetectionlimitofthreefoodadditives

2.3方法的精密度

取糕点样品6份加入苯甲酸（1mg/mL）、山梨酸（1mg/mL）、糖精钠（1mg/mL）标准溶液各1mL，按上述方法处理上机，平行测定6份样品，计算峰面积的相对标准偏差（RSD），苯甲酸、山梨酸和糖精钠峰面积的RSD分别为0.47%、0.64%、0.73%。

2.4方法的回收率

取糕点样品9份进行回收率测定，按5.0g/ml、25g/ml、50g/ml三个加标水平，按上述方法测定，回收率结果见表2。

表23种添加剂的加标回收

Tab.2Additiverecoveryofthreeadditives

2.5样品测定

随机选取市场中16个糕点样品，按1.2方法处理，按1.3色谱条件进行检测。结果显示，其均为检测出苯甲酸，检测出山梨酸的样品有12个，检测出糖精钠的样品有14个，但其均为超出GB2760-2014中的规定，该16份样品均合格。

3.结论

本文所建立的快速检测饮料中的三种食品添加剂的方法操作简便、准确、快速，在6min内完成样品分析，大幅提高了检测效率，适合大批糕点样品同时检测。

参考文献：

[1]GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》

[2]GB5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》.