介绍高质量冰冻切片的制作方法及体会

介绍高质量冰冻切片的制作方法及体会

罗才顺

罗才顺

（海南省人民医院病理科海南海口570311）

冰冻切片是一种在低温条件下使新鲜组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。其对于临床手术的确冷断的重要的意义，是病理医师进行冷确冷断的重要环节，也是临床病理普遍应用冰冻切片技术解决手术中所取新鲜标醜诊断问题，因此，做出高质量的冷冻切片至关重要。我科在工作中，逐步摸索出一种制片效果比较理想的冰冻切片制作法，在术中病理诊断取得满意的效果。现将我个人体会总结如下。

1材料与方法

1.1材料德国Leica公司的CM1900型恒温冷冻切片机、小型电动吹风机、一次性刀片、新鲜组织、普通胶水、固定液，Harris氏苏术精染液、0.5%盐酸酒精分化液、1%氨水溶液、1%水溶性伊红、各梯度乙醇溶液、中性树胶。

1.2方法：

1.2.1取材冰冻切片的标本取材要求平整，厚薄均匀，一般厚度为2mm，大小为1～1.5mm最好。

1.2.2包埋取一组织支承器，将组织平放于上面，滴加胶水覆盖组织面，速冻器速冰，当表面出现白色时，即可切片。

1.2.3切片切片前一定要调整好防卷板与切片刀的角度，防卷板与切片刀的角度为5°左右较理想，调好角度后进行组织修整，要修到组织最大面才能切出完整的片子，切下来的切片用干净的载玻片快速粘贴。切片用力均匀，厚度为4～5mm，太厚镜下不易观察，并且在染色过程中容易脱片。切好后立即放入95%乙醇95ml+冰醋酸5ml混合固定液中及时固定。

1.2.4染色完成切片后，做快速HE染色，从混合固定液中取出固定好的切片，用水洗掉固定液，放入苏木素染色2min左右，水洗后，0.5%盐酸酒精分化5s，水洗后，1%氨水溶液返蓝，水洗后，入1%水溶性伊红10s左右，水洗，梯度乙醇脱水，电吹风吹干，不用二甲苯透明，中性树胶直接封固即可。

2结果

以上方法进行快速冰冻切片，方法简单、制作时间短。整个制作过程（包括取材）一般只需要12～15min左右，切片完整，厚薄均匀，无冰晶裂隙，无脱片现象，组织细胞形态结构清晰分明，胞核显鲜明的蓝色，胞质是粉红色，颜色对比鲜艳，组织染色理想，切片质量优良。

3讨论

冰冻切片制作质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。因此，保证和提高制片质量是每个病理技术员的责任。同时，病理医师在取材时也要做到取材部位正确，大小适宜，厚薄均匀。工作中，手术室送检的活组织标本切忌浸入盐水、酒精或包入湿纱布内，取材时不能水洗，以免发生冰晶，也不能用干纱布、干棉花球或卫生纸包裹，以免发生粘连影响切片。还要避免过多的脂肪组织和坏死组织，最好的送检方法是将活组织放在拧干的盐水纱布速送病检[1]。取材时骨组织、钙化部分，也尽量避开。因冰冻技术只能驱除组织表面的热，取材组织厚度最好不超过3mm。组织过大，切片时阻力过大，易产生皱折，刀痕，组织易崩碎，增加切片难度，影响诊断。如需在同一标本托上放大小两块组织时，应尽量冻成一个平面，与刀锋平齐，以防切片不完整，发生漏诊。组织过小，应预先速冻一冷台面，再行包埋，利于制片。切片时先将组织轻修后再观察切面，尽量修至最大切面，有包膜的一定要切完整，小的结节或者重要病变部位要切到位，必要时可多个切面切片[2]。如果组织因冰冻时间长而变脆或者组织中有血块的，可以用拇指指腹轻轻触摸组织使其回温。反之，切片会出现皱褶重叠影响观察。对于脂肪组织过多时，可将脂肪部分朝上并适当调低温度和增加切片厚度。目前冰冻组织大都用“OCT水”因为办公用胶水系高分子聚合物与OCT具有相似的物理特性，所以使用效果与OCT一样，而且价格非常便宜，又不伤刀，非常值得使用[3]。

控制温度对于冰冻切片是最重要的，温度过高或过低均会影响切片的完整性和厚度。淋边结、甲状腺、子宫内膜、肝、肾、脾应尤为注意，因其质地受温度影响显著，所以为了保证有完整切面，温度必须严格控制在-12～-15℃，温度过低切片产生裂纹或无法制片。还要控制好组织的冷冻时间，一般3～4min。甲状腺、淋马结、肝、肾等组织冰冻时间过长则会变脆、易碎，一般应控制2min；对于子宫肌瘤、纤维组织的冰冻时间也不宜过长，过长会使组织变硬，不仅损刀而且组织片会出现裂痕；对于脂肪组织、冰冻时间应要长些。另外，切片机及切片刀在非工作状态下维持温度在-20℃为最佳。

冰冻切片是利用低温切片上的组织与常温下的载片的温度差立即贴片，所以粘贴速度要快。组织固定液有多种，如95%乙醇，95%乙醇95ml+冰醋酸5ml混合、甲醇、丙西同等。作者配制的混合用固定液（95%乙醇95ml+冰醋酸5ml）固定时间为1～1.5min。此混合固定液穿透力强，能迅速沉淀蛋白质，而又使细胞染色结构清晰。作者经反复实验，染色液预先加温到37℃左右时，将切片放入染色液中染色，染色效果明显好于没回温的或高于此温度的。脱水后直接用中性树胶封片，不仅缩短制片时间，节约二甲苯试剂，更重要的是减少环境污染，避免技术人员接触二甲苯有毒试剂。

总之，要获得一张高质量的冰冻切片更非易事。需要医生和技术员加强责任心，特别是技术人员要在日常工作中不断的摸索、学习和提高，方可保证制作出一张厚薄均匀、染色清晰的冰冻切片，为病理诊断的准确性提供较为便利的客观条件。

参考文献

[1]赫丽，张意平，肖同浩.制作冰冻切片的几点技巧[J].临床与实验病理学杂志，1996,3:258.

[2]崔京淑.冰冻切片的制作及常见问题对策[J].吉林医学，2009，30（17）：120.

[3]高艳.冰冻切片的制作方法探讨[J].云南医药,2005,4:363-364.