肝肾双排法对染铅大鼠驱铅作用的实验观察

作者：刘琳琳 马融 张喜莲 王亚雷 晋文蔓 蒋明辉

【摘要】 目的 探讨肝肾双排法对染铅大鼠排铅作用。方法 运用醋酸铅灌胃制作铅中毒模型，实验大鼠随机分为8组，利胆补肾颗粒高、中、低剂量组、依地酸钙钠组、依地酸钙钠＋利胆醇组、利胆醇组、模型组、空白对照组。药物治疗5周后，观察治疗前后各组大鼠血、尿、粪中铅的含量变化。结果 在降低血铅含量和增加尿铅排出量中，疗效依次为依地酸钙钠＋利胆醇组、依地酸钙钠组和利胆醇组；在增加粪铅排出量方面，疗效依次为依地酸钙钠＋利胆醇组、利胆醇组、依地酸钙钠组。利胆补肾颗粒高、中剂量组排铅作用优于西药组；其疗效与中药含量呈正相关。结论 肝肾双排法具有促进铅毒由肾－尿道及肝－肠道两条途径排泄，从而降低血铅含量，增加尿、粪铅的排出量。

【关键词】 铅中毒； 血液/分析； 尿分析; 粪便/分析； 动物,实验

【Abstract】 Objective To explore the effect of GanShenShuangPai (SGLD) in eliminating lead.Methods Lead poisoning model was made by filling the stomach with the acetic lead. All rats were randomly pided into eight groups: LDBS highdose group,LDBS middledose group,LDBS lowdose group,EDTACaNa2 group,EDTACaNa2+Livona group（combination of western medicine group）,Livona group,plumbum dyed model control group and blank control group(normal control group). After all the leadpoisoned rats were treated with medicine for 5 weeks,the change of the concentration of lead in blood, urine and excrement was observed. Results On reducing the concentration of lead in blood and increasing volume ejection of urine lead,the curative effect decreased from the EDTACaNa2+Livona group, to the EDTACaNa2 group and then to the Livona group; on increasing the volume of ejection of excrement lead, the curative effect decreased from the EDTACaNa2+Livona group to the Livona group and to the EDTACaNa2 group.Conclusion GanShenShuangPai can promote lead discharg from kidneyurinary passage and liverintestinal tract. It reduces the concentration of lead in blood and increases ejection volume of urine and excrement lead.

【Key words】 Lead poisoning; Blood/Analysis； Urine analysis； Feces/Analysis； Animals，laboratory

铅是一种造成人体多系统、多器官损伤的重金属元素，尤其是神经毒性最为明显。由于儿童自身生长发育特点，铅代谢与成人明显不同。在同一环境相同接触水平中，儿童对铅接触途径多，易感性强，吸收率比成人高6倍［1］,排泄率相对较低，而且骨骼中的铅向血液和软组织流动性大，更易造成铅在体内的蓄积，由此可见铅对儿童的危害更为明显［2］。因此,预防和治疗儿童铅中毒，减少铅损害，具有重要的现实意义。笔者以铅的排泄途径为切入点，在由肾脏经尿道排铅的基础上，提出促使肝细胞分泌胆汁，增加肠道排铅的新途径，结合中医基础理论，创立“肝肾双排”新治法，并据此研究出利胆补肾颗粒。本文以动物实验为基础，通过观察“肝肾双排法”对染铅大鼠驱铅效果，初步探讨肝肾双排法的驱铅作用及驱铅途径，为临床广泛应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康SD大鼠96只，雌雄各半，体质量（45±5）g，购自解放军军事医学科学院实验动物中心（动物许可证号：SCXK（军）2002001）。分笼饲养，自由饮食，控制室温在25 ℃左右，湿度55％左右。适应性喂养7 d后开始实验。

1.1.2 实验药品 醋酸铅（分析纯，天津市瑞金特化学品有限公司，批号：20070208）：用去离子水配成铅含量为4 g/L的溶液；利胆补肾颗粒(主要成分：茵陈、柴胡、大黄、茯苓、泽泻、郁金、枸杞子、何首乌、甘草，天津中医药大学第一附属医院药剂部)：按照高、中、低给药剂量用去离子水配成，生药含量分别为2.025，1.350，0.675 g/mL的溶液；依地酸钙钠（天津鑫耀氨基酸有限公司，国药准字：H12020890，批号：0511241）；利胆醇［广州星群（药业）股份有限公司，国药准字：H44023173，批号：20060403］。

1.1.3 实验器材及检测设备 聚四氟乙烯消化罐（成都科林分析技术有限公司），MILESTONE ETHOS 1型微波消解器（意大利Milestone公司），IRIS Advantage等离子发射光谱仪（美国热电公司）。

1.1.4 主要试剂 水合氯醛（分析纯，天津福晨化学制剂厂）；浓硝酸（优纯级，天津市化学试剂五厂）；双氧水（分析纯，天津市赢达稀贵化学试剂厂）；1 g/L铅标准溶液（GBW08619）、1 g/L钙标准溶液［GBW(E)080118］、1 g/L锌标准溶液（GBW08620）、1 g/L铁标准溶液（GBW08616）、1 g/L镁标准溶液［GBW(E)080126］、1 g/L铜标准溶液（GBW08165）均购自国家标准物质研究中心。

1.2 实验方法

1.2.1 模型制作 将96只大鼠按随机数字表法选出12只作为空白对照组，用去离子水按10 mL/kg灌胃，每日1次，持续5周。其余大鼠用醋酸铅溶液按10 mL/kg灌胃染铅，每日1次，持续5周。染铅结束后用毛细玻璃管取大鼠目内眦静脉血。将血放入经过去离子水处理过的盛有肝素钠的炮弹管中，微波消化，测定血铅含量。若血铅含量＞100 μg/L，证明铅中毒造模成功。

1.2.2 动物分组 将84只大鼠按随机数字表法分为7组，利胆补肾颗粒高、中、低剂量组、依地酸钙钠组、利胆醇组、依地酸钙钠+利胆醇组、模型组，每组12只。

1.2.3 给药方法 利胆补肾颗粒高、中、低剂量组：将利胆补肾颗粒水溶液按照20.25，13.50，6.75 g/kg灌胃，每日1次，持续5周。依地酸钙钠组：将依地酸钙钠按照0.05 g/kg腹腔注射，每周连续4 d，停3 d，持续5周。利胆醇组：将利胆醇按照0.02 mL/kg灌胃，每日1次，持续5周。依地酸钙钠+利胆醇组：按照依地酸钙钠组和利胆醇组给药方法分别给药。模型组：去离子水按照10 mL/kg灌胃，每日1次，持续5周。

1.2.4 检测方法 本实验中血、尿、粪样本的前处理采用微波消解法。血、尿、粪样本中的铅含量测定采用等离子原子发射光谱法。观测大鼠血、尿、粪中的铅含量。

1.3 统计学分析 实验数据用±s表示，采用SPSS 13.0进行统计处理。实验数据组间比较均用单因素方差分析(oneway ANOVA)；治疗前后比较均用配对t检验（PairedSample T Test）。2 结果

2.1 造模后血、尿、粪中铅的含量 见表1。表1 大鼠造模后血、尿、粪中铅的质量浓度注：与空白对照组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05。

表1结果表明，造模后各组血铅、尿铅、粪铅质量浓度均显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），说明造模成功。

2.2 治疗后血、尿、粪中铅的质量浓度 见表2。表2 造模大鼠治疗后血、尿、粪中铅的质量浓度注：与空白对照组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05；与依地酸钙钠组比较，cP＜0.05；与利胆醇组比较，dP＜0.05；与依地酸钙钠＋利胆醇组比较，eP＜0.05；与利胆补肾颗粒低剂量组比较，fP＜0.05；与利胆补肾颗粒中剂量组比较，gP＜0.05。

表2结果表明，各治疗组治疗后血铅含量明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；除空白对照组外，其余各组大鼠血铅含量均比治疗前显著降低。各治疗组治疗后血铅含量均<100 μg/L，西依地酸钙钠＋利胆醇组和利胆补肾颗粒高剂量组血铅含量最小，中药各剂量组与血铅含量呈负相关，高剂量组和低剂量组差异有统计学意义（P<0.05）；三组西药之间差异有统计学意义（P<0.05），其中依地酸钙钠＋利胆醇组血铅含量最低，依地酸钙钠组次之，利胆醇组最高。

各治疗组经过肾-尿道排出的铅，各治疗组治疗后尿铅明显高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05），其中中药高剂量组最多，其次是中药中剂量组、依地酸钙钠＋利胆醇组和依地酸钙钠组，中药各剂量组与尿铅排出量呈正相关。

各治疗组经过肝-肠道排出的铅，除中药低剂量组外，各治疗组治疗后粪铅明显高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05），中药高剂量组、中剂量组排出量，优于依地酸钙钠组和利胆醇组，中药各剂量组与粪铅排出量呈正相关。西药粪铅排出量依次为依地酸钙钠＋利胆醇组、利胆醇组、依地酸钙钠组。

3 讨论

现代医学认为铅是一种造成人体多系统损害的重金属毒物，对儿童神经毒性尤为明显。其排泄途径为近2/3经肾脏由尿道排出，近1/3通过胆汁分泌由肠道排出［3］。肝细胞对铅具有主动通透作用，可从血浆中摄取铅而排入胆汁，胆汁中的铅含量是血中的40～100倍。

目前西医传统驱铅方法是使用螯合剂（如依地酸钠钙等）与血铅结合成可溶性络合物从肾脏由尿排出，对软组织、脑、肾中的铅有较强消除能力，但缺点是药物特异性差，排铅同时非特异性地排泄内源性必需微量元素（钙、锌等）及维生素，干扰机体正常生理和生化功能，剂量大时对肾脏亦有损害。而利胆醇为慢性胆囊炎的辅助治疗药，可促使肝细胞分泌胆汁，促进消化。

笔者根据铅中毒儿童烦躁不安、任性冲动、注意力不集中等临床表现，认为其病机关键在肝失疏泄、肝胆郁滞，肾气不足、气化失常。铅邪内侵于肝，肝失疏泄，肝阳上亢，故见多动、冲动、急躁易怒；肝失疏泄，胆汁分泌排泄不利，铅邪不得外泄郁积体内，加重损害；肝失疏泄，还可致肾之气化、膀胱之开阖功能失常，从而影响铅邪由尿道排出。铅邪内侵于肾，更易致肾气不足，肾精化生乏源，髓海空虚、脑失所养，故见注意力不集中，学习困难、记忆力下降、智力减低等症；肾与膀胱相表里，肾气不足，气化失常，膀胱开阖失司，故影响铅邪的正常排泄。

因此本文采用疏肝利胆、补肾利水的肝肾双排法，一方面可直接促进胆汁的分泌与排泄，增加肠道排铅量；另一方面益肾填精，使肾气化充足，膀胱开阖有调，有利于铅邪由尿道排出，保障各脏腑器官正常的功能活动。据此研制了利胆补肾颗粒，方中柴胡调畅肝胆气机；茵陈除湿利胆退黄；大黄荡涤肠胃，通利水谷。郁金善调肝郁，行气利胆；泽泻、土茯苓利湿泻浊，助邪从小便出。何首乌养血益肝，固精益肾；枸杞子益肾填精，此二味固肝肾之本，甘草调和诸药。诸药合用，使肝疏泄有常，肾气化充足，气机畅和，二道得利，邪自得去。现代药理研究，柴胡、茵陈、大黄、郁金、甘草具有明显促进胆汁分泌和排胆作用，其中生大黄还能促进尿素氮和肌酐随尿排出体外，进而达到治疗铅性肾病的目的［4］；土茯苓、泽泻、茵陈有明显的利尿作用，因此为该药促进铅邪“肝肾双排”提供了依据。土茯苓亦有促智作用，柴胡、茵陈、大黄、枸杞子、泽泻等富含人体必需微量元素钙、锌、铁等，可与铅竞争肠道吸收过程中所需的转运蛋白，降低铅在肠道的吸收，阻断其肠肝循环；并有效地和铅竞争与组织细胞相结合，促进铅从组织细胞的排出；还能弥补西药在排铅的同时导致人体必需微量元素丢失的不足。

通过上述西药排铅实验可以看出肝肾双排法，明显优于其他疗法，如在降低血铅含量和增加尿铅排出量中，疗效为依地酸钙钠＋利胆醇组优于依地酸钙钠组和利胆醇组；在增加粪铅排出量方面，疗效依次为依地酸钙钠＋利胆醇组、利胆醇组、依地酸钙钠组。

笔者根据铅中毒患儿的临床表现和铅在人体的代谢特点，首次提出肝肾双排治法，并依法研制的利胆补肾颗粒经实验研究表明，排铅作用优于西药组；其疗效与中药含量呈正相关，利胆补肾颗粒药物作用机制还有待进一步的研究。

【参考文献】
［1］ 章丽娟.中国儿童铅中毒现状及其原因［J］.中国学校卫生,2004,25(6):771773.

［2］ Carrington CD,Sheehan DM,Bolger PM.Hazard assessment of lead［J］.Food Addit Contam,1993，10(3):325335.

［3］ 胡亚美,江载芳.诸福棠实用儿科学［M］.7版.北京：人民卫生出版社,2005:2448.

［4］ Chaurasia SS,Kar A.Protective effects of vitamin E against leadinduced deterioration of membrane associated typeI iodothyronine 5'monodeiodinase (5'DI) activity in male mice［J］.Toxicology,1997，124(3):203209.