高效液相法测定复方大黄痔疮栓中大黄素大黄酚的含量

(整期优先)网络出版时间:2019-05-03
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【摘要】   目的建立一种反相高效液相色谱法测定复方大黄痔疮栓中大黄素、大黄酚含量的方法。方法色谱柱为Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm,5 um),以甲醇-1%磷酸(85∶15)为流动相,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为254 nm。结果大黄素、大黄酚分别在0.003 944~0.039 44 μg,0.008 128~0.081 28 μg间有良好的线性关系,回收率分别为100.5%及96.6%,RSD分别为0.01%及1.16%(n=6)。结论该方法简单、灵敏度高、重现性好,可用于复方大黄痔疮栓中大黄素、大黄酚的含量测定。

【关键词】 复方大黄痔疮栓 大黄酚 大黄素 高效液相色谱

  Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of the contents of emodin and chrysophanol in Dahuangzhichuang suppository. MethodsThe Thermo Kromasil C18 column was used.The mobile phase was CH3OH-H2O 0.1%phosphorie acid solution(85∶15),the flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was at 254nm.ResultsThe linear ranges of emodin and chrysophanol were at 0.003 944~0.039 44 μg (r=0.999 9) ,and 0.008 128~0.081 28 μg(0.999 9),the average recoveries were 100.5%(RSD=0.01%,n=6) and 96.6%(RSD=1.16%,n=6), respectively.ConclusionThe method is reliable and accurate.

  Key words:Dahuangzhichuang suppository; Emodin; Chysohanol; RP-HPLC

  复方大黄痔疮栓主要由柿蒂、大黄、芒硝、田螺壳(炒)、橄榄核(炒炭)、冰片等中药组成,具有清热通便、止血、消肿止痛、收敛固脱之功效。用于各期内痔、混合痔之内痔部分,轻度脱垂等。制剂中成分较复杂,本文采用高效液相色谱法测定其中大黄中大黄素、大黄酚的含量,探讨该方的质量控制方法,为制剂的质量保证奠定了基础。

  1 仪器与试药

  Agilent 1100高效液相色谱仪,紫外检测器,四元梯度泵N2000色谱工作站(浙江大学智能信息研究所);BP211D电子分析天平(西德SARTORIOUS)。

  甲醇为色谱纯,水为双蒸水,其它试剂均为分析纯。大黄素、大黄酚对照品(中国药品生物制品鉴定检验所提供,批号分别为:0756-200211,110796-200310)。

  2 方法与结果[1]

  2.1 色谱条件

  色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1磷酸(85∶15);检测波长254 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温25℃。

  2.2 对照品溶液及供试品溶液的制备

  精密称取大黄素、大黄酚对照品各约5 mg,分别置50 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取大黄素1 ml,大黄酚2 ml,置25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(大黄素3.944 μg ·ml-1,大黄酚8.128 μg·ml-1)。

  取本品10粒,精密称定,切碎,混匀,取约一粒重,精密称定,置锥形瓶,精密加入甲醇50 ml,称定重量,加热回流1 h,冰水浴冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 ml,置50 ml圆底烧瓶中,蒸干,加2.5 mol/L硫酸溶液10 ml,超声处理5 min,再加氯仿10 ml,加热回流1 h,冷却,移置分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并入分液漏斗中,分取氯仿层,酸液用氯仿提取3次,8 ml/次,合并滤液,以无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,并定容置10 ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

  2.3 线性范围的考察

  精密吸取上述对照品溶液,分别进样1,2,4,6,8,10 μl,按上述色谱条件测定峰面积,并以峰面积(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线

  大黄素:A=3 525.39C-1.786 r=0.999 9

  大黄酚:A=5 134.99C-5.086 r=0.999 9

  表明大黄素在0.003 944~0.039 44 μg范围内线性关系良好;大黄酚在0.008 128~0.081 28 μg范围内线性关系良好。 2.4 精密度实验

  精密吸取上述对照品溶液重复进样5次,5 μl/次,测定大黄素、大黄酚的峰面积,其相对标准偏差RSD为0.89%,表明仪器精密度良好。

  2.5 稳定性实验

  取同一供试品溶液10 μl,按上述色谱条件测定5次,间隔2 h/次,其相对标准偏差RSD为1.24%,结果RSD分别为1.28%,1.26%。表明样品在8 h内稳定。

  2.6 阴性对照实验

  按处方比例配制不含大黄的阴性样品,按照含量测定方法进行测定,结果见图1,表明其它组分对测定无干扰。

  2.7 重复性实验

  按拟定的含量测定方法,对同一批样品(批号041802)分别制备5份供试品溶液,分别测定大黄素、大黄酚的含量,结果RSD=1.34%,表明方法重现性良好。结果见表1。表1 重复性实验结果(略)

  2.8 加样回收率实验

  取取以知含量的供试品(批号041802)10粒,切碎,混匀,取约半粒重量,精密称定,置锥形瓶中,精密加入适量对照品溶液,精密加入甲醇50 ml,按上述方法制样并进行测定,平行做6组,回收率分别为100.5%和96.6%。结果见表2~3。表2 大黄素回收率实验结果(略)表3 大黄酚回收率实验结果(略)

  2.9 样品测定

  分别精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl进样,按上述色谱条件测定。结果见表4。表4 样品含量测定结果(略)

  3 小结

  本品为多种中药配伍制成的中药复方制剂,成分较为复杂,且制样过程中基质——混合脂肪酸甘油酯较难去除,本试验采用冰水浴冷却过滤的办法除去基质并取得了较好的效果,再采用高效液相色谱法测定方中君药大黄的主要成分大黄素、大黄酚的含量,方法简单可行、灵敏度高,重现性好,结果准确,可用于该栓剂的质量控制。

【参考文献】
  [1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:17.