简介:摘要目的建立针对发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)、登革病毒(dengue virus, DENV)、汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)三种常见病毒性出血热病毒的现场应急快速检测方法。方法基于传统的TaqMan荧光探针技术,利用国产快速一步法RT-PCR试剂盒,结合magnetic induction cycler (Mic) qPCR仪,建立三种常见病毒性出血热病毒的快速荧光定量RT-PCR检测方法。利用三种病毒体外转录RNA及模拟样本、其他相关病毒临床样本及健康人血标本进行灵敏度、特异性、重复性验证。结果相较于传统的实时荧光定量RT-PCR方法,此方法所需时间大大缩短,可在35 min内完成检测。SFTSV、DENV、HTNV的最低检出限均小于100拷贝/PCR,与模拟对照样本及其他病毒临床样本无交叉反应,模拟阳性样本验证均可检出,且各组验证结果的Ct值变异系数均小于4%。结论本研究建立的快速荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性。对于现场应急检测和媒介生物标本筛查具有一定的应用前景。
简介:摘要目的结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(dengue virus,DENV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)的快速核酸检测方法,以实现这4种病毒感染的快速诊断。方法以ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因以及CHIKV的E1基因作为靶序列设计4组特异性引物探针;用体外转录RNA评价方法的灵敏性;用其他病毒核酸评价方法的特异性;ZIKV、YFV、CHIKV检测方法采用模拟阳性样本,DENV检测方法采用临床患者标本进行验证,并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果ZIKV、DENV、YFV、CHIKV4种方法的最低检出限分别是14.57拷贝/μl、94.27拷贝/μl、8.25拷贝/μl、223.19拷贝/μl;4种检测方法与其他病毒核酸无交叉反应;ZIKV、YFV、CHIKV模拟阳性样本检出率为100%,各浓度检测Ct值的变异系数均在2%左右;20份DENV临床患者标本检出率为100%,与传统荧光定量RT-PCR检测方法结果一致。结论本研究建立的ZIKV、DENV、YFV、CHIKV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性、稳定性,25 min内即可完成1次检测,可适用于现场实验室检测与早期诊断。
简介:主持人:一场网络攻击席卷全球,多家机构成了攻击目标,其中包括英国国家健康体系、中国的多所大学,以及美国联邦快递公司。攻击者是为了谋财,要求支付赎金。阿尔蒂,知道这次事件是怎么开始的吗?阿尔蒂(记者):我们目前还不清楚每一次攻击的确切时间,也不清楚这些攻击是单独行动还是联合作案,不过我们确实了解到这次攻击的范围很广——在一张攻击热点地图上,橙色的小光点遍布欧洲、美国、印度、巴西、俄罗斯和中国。我们收到来自西班牙和英国的报告。在英国国家健康体系中,多家医院无法正常运作,机能陷入瘫痪。你知道,医生和护士被彻底“关在门外”了,他们无法调用患者的档案。我之所以这么说……之所以说“关在门外”,我的意思是,这是一起勒索软件攻击。勒索软件是一种黑客技术。黑客利用这种技术,找到潜入你电脑的办法,比如给你发封邮件——那其实就是个自带恶意软件的木马病毒。你瞧,拿到你的文件后,黑客会突然下手,对文件进行加密,让你再也无法读取这些文件。文件都被锁起来了,若想解锁,你就需要一把破译的密匙。黑客会突然在你的电脑屏幕上弹出一个窗口说:“嘿,如果你想再次看到文件,就给我们支付多少多少比特币吧。”