简介:【目的】原核表达纯化人锌指蛋白(zincfingerprotein580,ZNF580)并制备抗人ZNF580单克隆抗体。【方法】将构建的重组质粒pET30a-ZNF580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropylbeta-D-galactosidase,IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备针对ZNF580的特异性单克隆抗体并通过ELISA和Westernblotting方法鉴定。【结果】含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19kDa,通过将Sp2/0细胞与免疫鼠的脾细胞融合获得了1株能稳定表达ZNF580抗体的杂交瘤细胞株(H4E4C5),其分泌的单克隆抗体的IgG亚类IgG2b,ELISA检测腹水抗体效价为1:1.28×10~5,Westernblotting结果显示抗ZNF580单克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本实验成功表达并纯化了ZNF580蛋白并制备了抗ZNF580蛋白的单克隆抗体,为进一步研究锌指蛋白ZNF580的功能奠定了基础。
简介:【目的】研究过氧化氢(H2O2)对EA.hy926内皮细胞锌指蛋白580(zincfinger580,ZNF580)表达的影响。【方法】先以不同浓度H2O2作用内皮细胞EA.hy926,测定细胞上清中乳酸脱氢酶(1acticdehydrogenase,LDH)确定细胞的损伤程度。选择适宜的H2O2浓度作用细胞,在不同浓度和不同时间点提取总RNA和蛋白,以RT-PCR检测ZNF580的mRNA表达水平,同时westernblotting检测其蛋白表达差异。【结果】随着H2O2浓度的升高,LDH释放随之升高,不同浓度H2O2作用EA-hy926内皮细胞后,ZNF580在mRNA转录水平和蛋白水平的表达均有增加,并呈现浓度依赖的趋势。同样的浓度为100μmol/L的H2O2作用EA-hy926内皮细胞不同时间后,检测可知ZNF580mRNA和蛋白水平的表达增加,与对照组差异有统计学意义(P〈0.05)。【结论】一定浓度和时间的外源性H,0,作用内皮细胞可促进ZNF580存一定程度表达上调。
简介:【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Westernblotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P〈0.05),且其增殖能力显著升高(P〈0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。
简介:【摘要】目的 研究湖北省麻城市泌尿系结石患者的结石成分及及构成情况。 方法 回顾性分析近两年泌尿系结石患者 580例,使用红外光谱自动分析仪对其结石成分及特征进行统计分析。 结果 男性多于女性:男 378例,女 202例;中年人结石例数最多,为 283例; 上尿路结石例数与下尿路结石例数,分别为487例与 93例;结石成分 以草酸钙结石所占比例最高,达到75.34%;其次为碳酸磷灰石,达到 12.58%。 结论 泌尿系结石患者结石成分以草酸钙及碳酸磷灰石为主,患者以中年男性多发,结石发病部位主要为上尿路结石。
简介:摘要目的探讨无症状孤立性镜下血尿病因。方法回顾性分析580例无症状孤立性镜下血尿病因。结果一过性血尿315例(54.3%),泌尿系统疾病235例(40.5%),泌尿系外疾病22例(3.8%),原因不明8例(1.4%)。结论无症状孤立性镜下血尿最常见病因为一过性血尿和泌尿系统疾病。
简介:摘要目的分析研究白带常规与BV唾液酸酶联合检测在诊断菌性阴道病中的临床价值,为细菌性阴道病(BV)临床诊治和预后提供诊治依据。方法采用白带常规检测法与BV唾液酸酶检测法,同时选取580例女性阴道分泌物作为标本,并将检测结果进行统计分析,了解BV唾液酸酶法阳性患者检测结果及患者年龄段分布情况。结果580例患者BV唾液酸酶阳性41例(7.10%),清洁度Ⅲ度比例最高(68.3%),其次为清洁度Ⅱ度、混合感染、清洁度Ⅳ度,41~50岁人群检出率最高(16.3%)。结论白带常规与BV唾液酸酶联合检测用于诊断BV实用性高,具有重要的临床价值。
简介:摘要目的了解2018年至2019年冬季我国北方地区儿童流感的病原分布情况,以流感病毒核酸检测结果为标准,评价流感病毒抗原检测方法的诊断价值,为临床用好流感病毒病原学检测方法提供数据参考。方法采集2018年12月至2019年1月在中国北方地区10家医院就诊的580例儿童流感样病例的呼吸道咽拭子样本,采用流感病毒抗原胶体金试剂和核酸检测试剂进行检测。结果全部580例临床样本中,采用抗原胶体金法共检出阳性样本256例(256/580例,44.1%),其中单纯甲型流感235例(235/256例,91.8%),单纯乙型流感21例(21/256,8.2%),阴性样本324例(324/580例,55.9%),未发现甲型、乙型流感同时阳性病例。采用甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)检测全部580份样本,共检出353例阳性(353/580例,60.9%),其中单纯甲型流感311例(311/353例,88.1%),单纯乙型流感41例(41/353例,11.6%),甲型、乙型流感混合感染1例(1/353例,0.3%),阴性227例(227/580例,39.1%)。在324例流感病毒抗原检测阴性样本中,111例(111/324例,34.3%)检测出流感病毒核酸阳性。太原地区甲型流感检出率为23.2%(22/95例),乙型流感核酸检出率为43.2%(41/95例),与其他地区存在明显差异。以核酸检测为标准,评价流感病原检测试剂的诊断价值,其敏感性、特异性、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比、约登指数和受试者工作特征曲线下面积分别为68.56%、93.83%、31.44%、6.17%、94.53%、65.74%、11.12、0.335、0.624和0.812。结论2018年12月至2019年1月我国北方大部分地区儿童流感以甲型流感病毒为主,太原地区以乙型流感为主。对比流感病毒核酸检测,抗原检测的特异性达到93.83%,敏感性68.56%,需要进一步提高,漏诊率31.44%需注意可能出现漏诊的情况。流感病毒抗原检测为阴性的患者,尤其是存在重症高危因素的病例,应尽快使用流感病毒核酸检测进行检测。