简介:目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)的细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内的响应和变化。方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内和线粒体内钙离子相对浓度的2种钙探针cyto-GCaMP6和4mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针的HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内的表达情况;在表达2种钙探针的细胞的培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP的响应。结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上的细胞表达了对应的钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3~6s)升至10倍,200s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)的时间稍滞后(5~8s),并且回落更慢,300s时至1.5倍。在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理的实验组,上述胞浆钙和线粒体钙浓度上升不明显。结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激的细胞实验体系,为进一步深入探究ATP等危险信号导致细胞的炎性损伤机制奠定了基础。
简介:摘要目的分析产后阴道壁膨出采用盆底肌肉电刺激辅助凯格尔运动治疗的效果。方法于我院2018年3月至2019年2月抽取56例产后阴道壁膨出患者,随机双盲法均分为每组28例,实验组治疗过程中运用盆底肌肉电刺激辅助凯格尔运动治疗,对照组治疗过程中运用凯格尔运动治疗。结果观察及对比2组患者组间数据,明显实验组自主满意度、治疗后盆底功能检测总分、治疗后POP-Q评分均更为理想,与对照组进行对比,存在统计学意义(P<0.05);对比2组患者治疗前盆底功能检测总分、POP-Q评分,差异不显著,P>0.05。结论产后阴道壁膨出采用盆底肌肉电刺激辅助凯格尔运动治疗,效果确切。
简介:目的:通过对TNF及铜绿假单胞菌(PAO1)刺激肺上皮细胞株(A549)表达胞浆蛋白NOD2的研究,进一步了解NOD2在机体天然免疫病原体识别过程中的作用.方法:培养呼吸道肺癌上皮细胞株A549,以TNF、铜绿假单胞菌PAOI刺激细胞,并以未刺激组做对照,通过半定量RT-PCR技术观察胞浆蛋白NOD2的表达变化.结果:与未刺激组比较,TNF、铜绿假单胞菌PAO1都能够上调A549细胞NOD2蛋白的表达.结论:TNFα与铜绿假单胞菌PAO1刺激能增强A549细胞胞浆蛋白NOD2的表达,提示细胞内受体NOD2在呼吸道天然免疫病原体识别过程中可能起重要作用.
简介:目的通过研究烟曲霉对细胞壁合成干扰物质及棘白菌素类药物的敏感性、烟曲霉在受热应激后HOG通路成分的表达变化探讨pbs2基因在热应激和胞壁应激的双重应激中的作用。方法烟曲霉野生株AF293和pbs2突变株在含钙荧光白(Calcofluorwhite,CFW),刚果红(Congored,CR)和十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate,SDS)的葡萄糖酵母浸液琼脂(YeastAgarGlucose,YAG)上生长,观察其对上述3种细胞壁合成干扰物质的敏感性。微量液基稀释法检测烟曲霉对米卡芬净和卡泊芬净的敏感性。实时荧光定量PCR法分析AF293受到热刺激前后菌体pbs2和hog1的RNA含量变化。结果50℃培养时pbs2突变株对胞壁合成干扰物质的敏感性较野生株AF293增强,600μg/mLCFW,400μg/mLCR及100μg/mLSDS完全抑制pbs2突变株生长,不能完全抑制AF293的生长;在37℃培养时,AF293和pbs2突变株敏感性没有差异。50℃培养时,卡泊芬净和米卡芬净对AF293和pbs2突变株的最低有效浓度(Minimumeffectiveconcentration,MEC)均为0.25μg/mL,但pbs2突变株在药物浓度为0.5μg/mL作用时生长完全受抑制,而野生株仍生长;在35℃和42℃培养时,AF293和pbs2突变株对两种药物的敏感性没有差异,MEC均为0.5μg/mL。50℃热应激后,AF293的pbs2和hog1的RNA表达量分别下降至37℃时的3%和13%;pbs2突变株的hog1降至应激前的35%。结论烟曲霉受热应激和胞壁应激的双重应激时,pbs2基因参与细胞适应反应,发挥保护作用。
简介:摘要目的研究微RNA-126(microRNA-126,miR-126)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下巨噬细胞极化的影响。方法用5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h,以及转染miR-126模拟物或阴性对照物24 h后再行5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h,实时定量PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质印迹法分别检测miR-126、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)以及M1型极化相关通路:核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化。结果Pg-LPS刺激巨噬细胞48 h后,与非Pg-LPS刺激组各因子mRNA水平(TNF-α:1.000±0.020,iNOS:1.125±0.064,miR-126:1.004±0.113,IL-10:1.003±0.053,Arg-1:1.130±0.061)相比,Pg-LPS刺激后TNF-α和iNOS的mRNA水平(3.105±0.278、4.296±0.003)均显著上升(t=6.53,P=0.003;t=42.63,P<0.001),miR-126、IL-10、Arg-1表达(0.451±0.038、0.545±0.004、0.253±0.017)均显著下降(t=7.95,P=0.001;t=7.36,P=0.002;t=11.94,P<0.001)。iNOS、TNF-α、Arg-1、IL-10蛋白表达量变化与mRNA变化趋势一致。同时,磷酸化NF-κB p65(phospho-NF-κB p65,p-p65)、磷酸化胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化p-38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38)相对蛋白表达均显著上升(t=2.78,P=0.013;t=18.70,P<0.001;t=5.65,P=0.005)。转染miR-126模拟物后,Pg-LPS刺激下与转染阴性对照物组各因子mRNA水平(TNF-α:1.141±0.197,iNOS:1.173±0.115,IL-10:1.032±0.138,Arg-1:0.933±0.044)相比,TNF-α、iNOS的mRNA水平(0.342±0.022、0.588±0.085)均显著下降(t=5.35,P=0.006;t=5.05,P=0.007),而IL-10、Arg-1的mRNA水平(1.786±0.221、2.152±0.229)均显著上升(t=3.71,P=0.021;t=6.21,P=0.003)。同时,iNOS、p-p65、p-ERK、p-p38相对蛋白表达水平均显著下降(t=13.00,P<0.001;t=6.98,P=0.002;t=10.86,P<0.001;t=8.32,P=0.001),Arg-1蛋白表达则显著上升(t=12.08,P<0.001)。结论Pg-LPS可促进巨噬细胞的M1型极化;miR-126通过下调M1型极化相关通路,抑制Pg-LPS对巨噬细胞向M1型极化的作用。
简介:【摘要】目的:分析在产后阴道壁膨出护理中开展盆底肌肉电刺激辅助凯格尔运动的临床作用。方法:随机筛选2021年1月至2023年1月期间我院产科接收的产后阴道壁膨出产妇60例作为本文分析对象,通过电脑随机选取方式将入选的产妇分成实验组和参比组各有30例,参比组产妇给予单独凯格尔运动,实验组则添加盆底肌肉电刺激辅助干预,将两组最终康复效果进行对比。结果:最终经过对比分析显示,实验组产妇的临床症状改善时间明显短于参比组,尿失禁程度低于参比组,产妇盆底肌功能恢复效果优于参比组,(P<0.05)。结论:在产后阴道壁膨出产妇中开展盆底肌肉电刺激辅助凯格尔运动,可尽早改善患者的临床症状,减少产后尿失禁发生,有效促进产妇盆底功能恢复。
简介:2007年的数码装备会更强大、更小巧、更热门、更冷艳、更快捷、更无线,总之会更好。什么?你说你自己能够抵御住升级的诱惑?请你阅读接下来的几页之后再下结论——T3认为,恐怕那时候你满脑子想的应该都是如何说服老婆大人开恩批准你的挥霍计划了。