简介：摘要高毒力肺炎克雷伯菌是经典肺炎克雷伯菌的一种高毒力变异体，可在免疫功能健全宿主引起严重感染，具有致病性强、病死率高、预后差等特点。目前，高毒力肺炎克雷伯菌已经成为全球关注的重要病原体之一，给公共卫生安全和临床医疗带来重大挑战。本文就国内外有关高毒力肺炎克雷伯菌的荚膜多糖、铁载体、脂多糖和黏附素及新近发现的Ⅵ分泌系统等毒力因子进行阐述，有助于加深对该菌致病机制的理解与认识。

简介：摘要目的将质粒APP695进行1个突变体构建。方法将第1785bp-1786bp（以目的基因ATG为起始）的碱基GA突变为TC，3'端去掉终止密码子TAG，克隆至pEGFP-N2载体中。结果构建了突变质粒APPswe。

简介：通过分析细菌中质粒的存在状态和调控机制的相关研究进展，为研究细菌致病机理、机体免疫防护机制，分析确定菌株的标识基因和标识分子，以及研究质粒表达调控分子机理提供思路，进而为应用基因工程手段构建筛选新的表达载体、研究新型疫苗候选株提供理论基础。

简介：摘要目的建立转座子突变文库，筛选高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKp)的新毒力基因。方法构建转座子突变文库，血清处理，通过转座子测序(transposon sequencing, Tn-seq)比较分析血清处理前后各基因突变株在文库中丰度变化，并对筛选出的基因进行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)注释和富集分析。结果以处理后丰度低于初始丰度20%为界，共筛选出405个基因，其中351个基因在HS11286、NJST258_1、NTUH-K2044和RJF293等4株参考菌株中保守存在，占86.7%，10个基因为NTUH-K2044和RJF293两株高毒力株共有而低毒力株HS11286和NJST258_1缺失；荚膜多糖基因簇中基因如糖基转移酶基因wzy、聚集蛋白基因wzi、荚膜转运蛋白基因wza等突变株在血清处理后不能检出，气杆菌素、沙门氏菌素等铁载体基因簇在各文库中的丰度变化不超过1倍；KEGG注释结果显示，注释最多的基因为参与氨基酸代谢、辅助因子和维生素代谢、碳水化合物代谢等。结论Tn-seq是功能基因筛选的可靠方法，本研究成功筛选出405个hvKp的候选新毒力基因，为后续深入研究hvKp的新毒力基因功能和调控机制提供实验依据。

简介：目的：选择α-MSH作为重组毒素的导向部分，来自人类本身的血管生成素基因Ang作为毒性部分，合成具有高度特异性的重组毒素。方法：用PCR方法将MSH基因和Ang基因通过柔性Linker（Gly4Ser）2，连接成为一个基因，并定向克隆到原核表达载体pET20b中，构建了重组毒素的表达质粒。结果：MSH基因和Ang基因可以合成重组质粒pET／MSH-Ang。结论：通过酶切鉴定和核酸序列测定证明了重组毒素表达质粒构建的正确性。

简介：摘要目的明确铁载体毒力基因entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。方法从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建entB基因缺失株ΔentB、回补株C-ΔentB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、ΔentB、C-ΔentB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。ΔentB组的生长速度明显快于CRKP-27组（P=0.008）和C-ΔentB组（P=0.001），说明entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。entB组与CRKP-27组（P=0.001）和C-ΔentB组（P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（P=0.023）和C-ΔentB组（P=0.024）相比，ΔentB组小鼠生存率明显增高，说明entB基因增加了CRKP菌株的毒力。结论铁载体毒力基因entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：摘要目的分析1株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药及毒力特征。方法将浙江大学医学院附属第二医院粪便中分离到的1株CRKP命名为肺炎克雷伯菌C35，采用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度；全基因组测序和基因组分析确定菌株所携带耐药基因和毒力基因；核心基因组单核苷酸多态性（SNP）分型分析CRKP菌株之间的同源性关系；采用接合试验评估耐药基因的转移能力和效率；采用大蜡螟毒力实验测定菌株的毒力表型。结果肺炎克雷伯菌C35对大多数受试药物耐药，尤其碳青霉烯类、舒巴坦和多黏菌素。SNP分型显示肺炎克雷伯菌C35与多株分离自本院不同病房的CRKP菌株具有很高的同源性。该菌属于ST11型，携带包括blaKPC-2、blaCTX-M-199、mcr-1和tet（A）变异体等在内的13种耐药基因。blaKPC-2基因位于>69 800 bp的IncFⅡ型质粒上，blaCTX-M-199和mcr-1基因共同位于>64 800 bp的IncI2型质粒上，tet（A）变异体位于83 628 bp的不可分型质粒上，3种质粒均为可接合性质粒。肺炎克雷伯菌C35还携带rmpA和rmpA2毒力基因以及气杆菌素（aerobactin）相关基因iucABCD，为典型的碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）。该菌在大蜡螟感染模型中也显示了较强的毒力表型，感染肺炎克雷伯菌C35菌株48 h后大蜡螟幼虫存活率仅为16.7%，明显低于无毒力对照菌株的80.0%。结论本研究在1株肠道定植CR-hvKP中检测到多个可接合性耐药质粒，包括同时携带blaCTX-M-199和mcr-1基因的IncI2质粒，需引起警惕，并对此类菌株进行主动监测。

简介：摘要肺炎克雷伯菌是院内感染的常见条件致病菌。近年来，随着肺炎克雷伯菌所致肝脓肿患者的发病数不断增加，高毒力肺炎克雷伯菌引起广泛关注。高毒力肺炎克雷伯菌具有高黏液表型和高毒力的特征，可引起免疫力正常的患者发生重症社区获得性感染，如肝脓肿、肺炎、化脓性眼内炎及化脓性脑膜炎等。本文对高毒力肺炎克雷伯菌的流行病学及毒力因子的研究进展作一综述。

简介：质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶主要由肠杆菌科细菌产生,具有比ESBLs酶更广的水解底物谱,能有效水解一、二、三代头孢菌素类、头霉素类及单环类抗生素,且不被克拉维酸抑制.携带编码AmpC酶基因质粒具有可转移性,导致耐药性广泛传播.本文就质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶的发现、流行病学特点、酶基因特点、药物敏感性等方面进行综述.

简介：目的介绍一种改良的纯化细菌质粒DNA的方法。方法针对传统的PEG纯化方法,取消PEG8000的纯化步骤,增加溶菌酶的浓度及酚-氯仿处理次数。结果新的纯化方法提取的质粒量比传统方法要多,而且纯度足以用于细胞研究。结论尽管目前已有质粒纯化试剂盒出售,但经改良的传统质粒纯化法仍然具有经济、实用的价值。

简介：摘要目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,EcoRI和ApaI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液，Westernblotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平。结果双酶切证实shRNA正确插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功;Westernblotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调。结论成功构建人FasL基因RNA质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体。

简介：104株不动杆菌应用K-B药敏纸片琼脂扩散法和单药纸片搭桥法进行药敏试验,同时进行质粒分析。104株均检出质粒,流行型菌株对庆大、卡那、妥布、红霉素、头孢孟多,复方新诺明的耐药率显著高于非流行型,多重耐药菌株流行型比非流行型高。头孢唑啉耐药率最高,依次为头孢噻甲羧肟、氨苄青霉素、青霉素、氯霉素等;多粘菌素最敏感,依次敏感萘啶酸、头孢氨噻肟和丁胺卡那霉素。新生儿该菌感染选用头孢氨噻肟和丁胺卡那霉素,联合用药噻肟+妥布或噻肟+丁卡为宜。

简介：摘要布鲁氏菌病(brucellosis),简称布病,是由布鲁氏菌(Brucella)感染所引起的一种人畜共患病,在世界范围内广泛流行,给我国公共卫生、畜牧业和社会经济的发展带来重大损失。然而,对于布病的特异性临床指征、布鲁氏菌的毒力因子以及其致病机制的了解非常有限,这导致临床上对布病的诊断和治疗具有一定的局限性。本文从布病的流行现状出发,重点阐述了布鲁氏菌的毒力因子及致病机制,综合概述了布病发病过程中布鲁氏菌在受感染机体内的活动轨迹和状态,为布病致病机制的深入研究提供新思路,并为疫苗的研发和临床诊疗提供全面参考。

简介：在15℃、20℃、25℃、30℃及35℃条件下分别测定了吡虫啉、丁硫克百威和氰戊菊酯对烟蚜毒力的温度效应。结果显示,吡虫啉和丁硫克百威对烟蚜的毒力呈正温度效应,但随着温度上升,烟蚜对吡虫啉的敏感性变化比丁硫克百威大。吡虫啉毒力在35℃时为15℃时的7.12倍;而丁硫克百威为2.88倍。氰戊菊酯对烟蚜的毒力呈负温度效应,在35℃时的毒力约为15℃时的1/5。鉴于这些药剂的毒力受温度影响的规律,建议在气温较低时选用氰戊菊酯等负温度效应的农药,在气温较高时则选用吡虫啉等正温度效应的农药,以充分发挥农药的性能,减少农药使用量、降低防治成本。

简介：随着氟喹诺酮类抗生素在临床上日益广泛的应用,细菌的耐药性问题日趋突出,迫切需要对其耐药机理及防治进行研究。国内外迄今为止对氟喹诺酮类抗生素耐药性研究认为,细菌对这类抗生素的耐药性为染色体介导,尚未发现氟喹诺酮耐药质粒。我们首次从一株临床分离的大肠杆菌(E.coli)多种耐药株中克隆到氟喹喏酮耐药质粒,并对质粒的结构及耐药性进行了进一步的分析。通过对临床分离的多重耐药菌E.coliHx88108的

简介：摘要高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）具有较高毒力及高黏液性，易造成健康宿主感染，以肝脓肿最为常见，并引发多部位侵袭性感染及血流感染。目前耐药hvKP相关菌株，尤其是耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的出现，给临床诊疗带来更大的挑战。本文从hvKP的流行现状、毒力因子、耐药机制及其感染治疗等方面进行综述。

简介：摘要高毒力肺炎克雷伯菌日益活跃，已成为全球关注的重要病原体之一。与经典的肺炎克雷伯菌不同，该细菌多造成免疫功能健全宿主的感染，以肝脓肿最为常见，常伴有多器官系统的共感染或血流感染，导致发生严重致残、致死事件。本文从高毒力肺炎克雷伯菌的起源、定义、流行病学特点、发病机制以及临床诊疗等方面进行综述。

简介：近年来,肺炎克雷伯菌已成为仅次于大肠埃希菌的第二大条件致病菌,是引起社区和医院获得性感染不可忽视的潜在病原体。一般情况下肺炎克雷伯菌不致病,当机体免疫力下降或长期使用抗生素导致菌群失调时可引起感染。

简介：【摘要】目的：对高毒力肺炎克雷伯菌感染病例临床特点及耐药情况进行分析。方法：选择在我院进行诊疗的高毒力肺炎克雷伯菌感染患者作研究对象，病例数48例，开展时间2020年1月至2021年4月，分析患者临床特点，并采用PCR法对高毒力肺炎克雷伯菌耐药情况进行检测，与经典毒力肺炎克雷伯菌耐药性进行比较。结果：高毒力肺炎克雷伯菌感染病例临床特点为社区获得性感染，伴随泌尿系统感染8例、肝脓肿37例。患有糖尿病15例、肺部感染20例。高毒力肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星、复方磺胺、头孢曲松钠的耐药率显著低于经典毒力肺炎克雷伯菌（P＜0.05）。结论：高毒力肺炎克雷伯菌感染病例临床特点为社区获得性感染，且伴随其它系统感染、基础疾病，需要根据耐药情况合理选择治疗药物，做好抗感染治疗，提高治疗有效率。