简介：在人教版高中《生物·选修3·现代生物科技专题》关于PCR的教学中，有几个问题会经常困扰教师和学生。下面就列举这些问题并作以解答。

简介：利用分子生物学中的聚合链式反应（PCR）方法对毛皮中的貂基因成分进行鉴定检测研究。研究设计了貂线粒体基因特异性引物和探针,优化了PCR反应体系和条件,采用了普通PCR和实时荧光PCR（RT-PCR）两种PCR检测方法进行比较。结果表明,设计的引物和探针在9份貂肉样品中通用性好,在兔、狐狸和貉子等10种其他物质中特异性良好,在于貂毛皮的PCR鉴定检出率为100%。但是在实时荧光PCR检测方法对样品的前处理要求比较高,检出率低于普通PCR检测方法,只有不到66.7%,对于市场上的貂毛皮鉴定检测,还是普通PCR方法比较好。

简介：摘要目的指导工作人员在PCR实验室日常工作中更好的了解掌握PCR的操作。

简介：聚合酶链式反应（PCR）技术的问世和发展是分子生物学研究领域中最重要的进步之一.在PCR技术中,DNA聚合酶起着至关重要的作用,从某种意义上说,DNA聚合酶的研究进展决定着PCR技术的发展趋势和应用范围,研究者们一直在努力探寻着酶学性能好、保真度高的PCR用DNA聚合酶.高中生物人教版选修1和选修3都对PCR技术的原理和过程作了详尽的介绍,但对热稳定DNA聚合酶的描述极少,仅仅提及Taq酶.因此,有必要对PCR用DNA聚合酶的基本类型和特点进行分析归纳.

简介：为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2＋、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR25μL最佳反应体系为：2.5μL10×Buffer,2.0mmol/LMg2＋,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

简介：目的：建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法：采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果：建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCRBuffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0mmol·L-1,dNTPs0.5mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA为30ng;扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,51.7℃退火1min,72℃延伸1.5min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7min,4℃保存.结论：建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

简介：目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物，建立染料法（SYBRgreenI）实时荧光定量PCR，评估其灵敏性及特异性；并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r2=0．99），灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测，最低检出浓度为2拷贝／¨l，比普通PCR检测方法提高1～2个数量级，并且具有较好的重复性；建立的SYBRI染料法具有良好的特异性，与立氏立克次体R株等其他5种立克次体，以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增；用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器，以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测，其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本，结果脾脏中东方体检出量最多，肝脏和肾脏次之，血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性，适合各种样本中东方体的快速检测，可用于实验室的快速诊断。

简介：摘要目的探讨应用荧光定量PCR检测痰结核杆菌DNA的临床意义。方法随机抽取2008年2月～2013年10月间我院收治肺结核（经初步诊断）患者80例，同时抽取其他肺病患者60例，分别直接涂片痰浓集进行结核杆菌培养和FQ-PCR检测TB-DNA。结果痰标本采用FQ-PCR法检测检查结核杆菌灵敏度最高，比直接涂片、培养、浓集涂片检测方法明显灵敏，且差异显著(P<0.05)，具有统计学意义。结论FQ-PCR法检测痰结核杆菌TB-DNA方法更加精准，值得临床广泛应用。

简介：摘要自身免疫性疾病是指机体的免疫系统产生的抗体，对自身细胞组织产生免疫作用的疾病，由于该慢性炎症性疾病的致病因素尚未查明，因此随着疾病的恶化，患者体内T淋巴细胞和B淋巴细胞就会过度活化，并对其体内的器官和系统造成危害。本文在对自身免疫性疾病发病加以概述的基础上，对该类型疾病的发病机制进行了综合论述，并分析了不同致病机理与自身免疫性疾病之间的关系，从而为自身免疫性疾病的有效防治提供有效参考。

简介：为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2＋浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。

简介：本研究利用Me2Em4正反向引物组合对影响梾木属SRAP-PCR反应体系的Mg2＋、Taq聚合酶、dNTP和引物浓度4个因素进行L9（34）正交试验,采用正交设计直观分析及方差分析对影响SRAP反应的4个因素进行分析,并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结果表明,梾木属SRAP-PCR20μL反应体系的最佳组合为：Taq聚合酶2.0U、Mg2＋浓度1.5mmol/L、dNTP浓度0.15mmol/L、Primer浓度0.30mmol/L、模板DNA浓度5.5mg/L以及含有2μL不含Mg2＋的10倍稀释缓冲液。各因素对梾木SRAP-PCR反应的影响大小依次为：dNTP、Taq聚合酶、Mg2＋和Primer。最后运用优化体系从100对SRAP引物组合中筛选出26个多态性SRAP标记,可用于梾木属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。

简介：摘要自20实际80年代PCR技术问世以来，该项技术以在医学及生物学等多个领域广泛应用，为医学疾病的精确诊断创造了条件。但在PCR技术的应用阶段，存在各类隐患如临床标本的处理和污染的控制等，成为PCR技术应用中不可忽视的问题，也是PCR技术成功的关键。因此，在现代医学中对PCR技术的应用提出了更高的要求，必须提高医学检验人员临床诊治水平，同时提高PCR的准确度和可信度，只有这样才能切实保障人民安全健康，防止医疗纠纷的发生。本文通过对PCR技术在医学检验中的应用的深入研究，提出了该项技术在医学检验中的质量控制方法及相关应用。

简介：为建立鸭瘟病毒（DPV）快速、敏感的检测方法,本研究利用PCR技术扩增出DPVUL30基因中510bp的保守序列,并克隆到pMD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了DPV的SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达5×101拷贝,与鸭细小病毒、鸭圆环病毒、小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭H9亚型流感病毒和鸭副粘病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床DPV的检测。

简介：自身免疫性甲状腺炎是一类器官特异性自身免疫性疾病。理论上免疫调节药物（如糖皮质激素、免疫抑制剂和硒制剂等）是针对自身免疫性甲状腺炎的病因治疗．且近年来的研究提示上述药物可能有一定疗效，但考虑到药物的不良反应以及成本效益比等问题．上述药物目前尚不是自身免疫甲状腺炎患者的常规治疗方法，应用时需综合考虑获益及风险。本文就免疫调节药物在桥本甲状腺炎及产后甲状腺炎中的应用进行简要介绍。

简介：免疫力是在机体与各种致病因子不断斗争的过程中形成并逐渐加强的。婴幼儿阶段容易生病是很正常的，家长没必要过于紧张。

简介：免疫接种是指给鹅注射或口服疫苗、菌苗等生物制剂,以增强鹅对病原的抗病力,从而避免特定疫病的发生和流行。同时,种鹅接种后产生的抗体,还可通过受精蛋传给雏鹅,提供保护性的母源抗体。1鹅的免疫接种程序我国已有多种疫苗用于家禽传染病的预防,但目前用于预防鹅的传染病的疫苗还较少。目前对小鹅瘟、禽霍乱、禽流感等主要疾病可用疫苗预防。一般免疫程序也以此3种病为主。

简介：摘要目的采用ELISA法和荧光RT-PCR法分别检测手足口病EV71，比较两种方法的差异性。方法严格按ELISA法和荧光RT-PCR法的操作要求分别检测221例临床标本手足口病EV71。结果两种方法检测EV71的结果221份标本，ELISA法阳性51例，荧光RT-PCR法阳性55例。两种方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论本实验结果表明，两种方法的灵敏度分别为28.2%和30.4%，特异性均为100%，两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。

简介：

简介：现代免疫学的概念是：机体识别和清除非自身的大分子物质,从而保持机体内外环境平衡的生理学反应。免疫的基本功能包括：抵抗微生物与寄生虫的感染;清除衰老死亡的细胞,保持机体自身稳定;严密监视肿瘤细胞的出现,一旦出现就能立即识别,并调动免疫系统在其尚未发展之前将其消灭。1先天性免疫先天性免疫是指家禽生来就已具有的对某种病原微生物及其毒素的抵抗能力。

简介：现代免疫学的概念是：机体识别和清除非自身的大分子物质,从而保持机体内外环境平衡的生理学反应。免疫的基本功能包括：抵抗微生物与寄生虫的感染,清除衰老死亡的细胞,保持机体自身稳定,严密监视肿瘤细胞的出现,一旦出现就能立即识别,并调动免疫系统在其尚未发展之前将其消灭。1先天性免疫先天性免疫是指家禽生来就已具有的对某种病原微生物及其毒素的抵抗能力。1.1防御屏障皮肤、粘膜、腱鞘、肌膜、浆膜等的屏障作用以及血脑屏障、胎盘屏障等等。1.2吞噬作用嗜中性粒细胞、