简介：NAC转录因子在植物逆境应答中具有重要的作用。本研究从番茄中克隆了一个NAC基因SlNAC71。该基因编码区长1059bp,编码352个氨基酸,预测分子量约为39.51kD,等电点为8.40。推测的氨基酸序列中含有1个高度保守的NAM结构域。SlNAC71基因序列具有miR164靶序列识别位点。亚细胞定位预测SlNAC71蛋白定位于细胞核。进化树分析发现,SlNAC71和AtNAC分为一个分支。组织特异性表达模式分析表明在检测的所有组织中SlNAC71都有表达,在叶中表达量最高,在茎中表达量最低。SlNAC71基因的表达受高盐诱导,说明番茄SlNAC71基因可能参与番茄对高盐胁迫的应答。

简介：目的：克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果：cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论：成功克隆和表达了COPS3cDNA。

简介：摘要：筇竹作为云南部分地区重要的经济产业，具有很高的研究价值。钾对于筇竹的生长发育有着决定性作用。在乡村振兴大背景下，进一步研究筇竹生长特性有着重要意义，本研究以筇竹实生苗为实验材料，克隆出钾离子通道基因，命名为AKT，对其所编码蛋白的理化特性，二级和三级结构、跨膜域、序列比对进行了分析预测并构建了系统进化树，经过分析其表达特征发现，AKT基因全长3069bp，开放阅读框为2526bp，可以对841个残基氨基酸进行编码，蛋白的分子量为94758.07Da，属于亲水性不稳定蛋白，有5个跨膜结构域。通过荧光定量PCR分析，AKT基因在筇竹中的相对表达量依次为茎、根、叶，且在不同时间和不同浓度盐胁迫处理后相对表达量有不同的变化。

简介：κ-银环蛇毒素(κ-bungarotoxin，κ-BGT)属于突触后神经毒素，能选择性的识别α3β2亚型的神经元烟碱乙酰胆碱受体，可作为药理学研究的工具药。由于κ—BGT分离提取比较困难，难于从自然界中大量获取，无法满足各项研究的需要，所以本文探讨在大肠杆菌和毕赤酵母表达体系中表达κ—BGT及其在实验室规模生产的可行性。

简介：以油茶湘林4号为材料,通过RT-PCR和RACE的方法克隆出油茶磷酸转运子Pht1基因家族一个成员的全长cD-NA序列,命名为CoPht1;1（GenBank登录号：JX403969）,通过实时定量PCR的方法检测了不同磷浓度下该基因在根系中的表达水平。结果表明：CoPht1;1CDS长度为1626bp,编码542个氨基酸,与其他物种的Pht1氨基酸序列具有较高的相似性,其中与夹竹桃科长春花的Pht1相似性最高,达到88%;蛋白质二级结构和拓扑结构预测表明,CoPht1;1具有跨膜蛋白的主要特征,与其他物种的Pht1具有一致性;实时定量RT-PCR结果表明,油茶Pht1基因的表达受低磷诱导,并在受磷胁迫处理（P浓度为0.1mmol/L）15d时表达量最高。

简介：mRNA差异展示是筛选差异表达基因最有效的技术之一,靶方回收的差异条带用非生物素标记的引物与dNTPs进行PCR扩增,DDRT-PCR）是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一

简介：植物生长发育过程中会遭遇各种病原物的攻击,植物为了应对这些危害并适应外界的生存竞争,逐渐演化出了复杂的防御机制。NHL基因家族庞大,部分NHL基因受病原物诱导后会过量表达,增强植物对多种病原菌的抗性,是与植物防御机制密切相关的蛋白。本研究以津南实芹和美国西芹2个芹菜品种为试验材料,分别克隆出NHL-like蛋白基因AgNHL。序列分析表明,上述2种芹菜的AgNHL基因序列均含636bp的开放阅读框,编码211个氨基酸。2种芹菜碱基序列,只有第36位不同,津南实芹为T,美国西芹为C,2种碱基序列相似性高达99.84%,编码的氨基酸序列相同。进化分析显示,2种芹菜的NHL-like蛋白与葡萄、大豆等植物的相似度较高,在第80～185氨基酸间含一个LEA-2蛋白保守结构域。荧光定量PCR结果表明,AgNHL基因主要在芹菜茎中表达,根中表达量最低,有明显组织特异性,品种差异也很显著。对2种芹菜分别进行4℃低温、38℃高温、20%PEG处理、0.2mol/LNaCl处理2h表达分析显示,低温、盐处理下该基因表达量明显上升。

简介：为明确SOC1基因在叶片中的生理作用,克隆到烟草中SOC1基因的完整开放阅读框,全长806bp。农杆菌介导转化烟草后,获得26棵转基因植株,其中23棵鉴定为阳性植株,转化率为88.46%。与野生型烟草K326相比,获得的SOC1过表达烟株开花提前,株高增加,叶片宽大。半定量RT-PCR结果显示,SOC1过表达不影响叶片中Rubisco大亚基、蔗糖磷酸合成酶和蔗糖合成酶基因的表达水平,但提高了抗坏血酸氧化酶的表达水平;提高了碳酸酐酶活性、蔗糖含量和还原性抗坏血酸含量,并降低了抗坏血酸过氧化物酶活性。表明SOC1可能通过影响氧化还原状态而提高碳酸酐酶活性和光合速率。

简介：为研究低温胁迫前后小麦抗冻基因转录水平的表达差异,以不同生态类型的8个小麦品种为试验材料,克隆其超氧化物歧化酶基因sod并进行表达分析。结果表明,低温胁迫条件下,春性品种sod基因转录水平表达量显著提高,而其他生态类型的sod基因转录水平表达量无明显变化。

简介：在光周期途径中，FT基因是决定植物开花时间的重要基因。该研究利用同源克隆的方法从“YZ-14”紫茄品种中分离克隆得到了FT基因，命名为SmFT。序列分析表明，SmFT基因的cDNA全长691bp，开放阅读框为528bp，编码176个氨基酸，与同科作物马铃薯中FT基因序列的相似性高达92％，与番茄中FT基因序列的相似性也能达到91％。

简介：FLOWERINGLOCUSD（FLD）是植物自主开花途径花发育基因，在植物营养生长向生殖生长转变的过程中起重要的调控作用。本研究利用同源基因克隆法结合RACE技术克隆了蜻蜒凤梨似echme口触ciat曲花发育基因FLD的类似基因AfFLD。序列分析比对表明，AfFLD所推测的氨基酸序列包含有LSDl-LIKE亚家族两个高度保守的结构域：SWIRM结构域和胺氧化酶结构域，该蛋白与玉米、拟南芥的FLD蛋白的同源性分别为72％3N73％。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析了乙烯处理不同时间FLD基因的表达模式，结果表明乙烯处理不同时间的各组中，处理后1d时FLD的表达量达到最高值，其中表达量最高为0h的2．5倍。本结果为开花自主途径中相关基因对乙烯处理后的响应机理的研究提供理论基础。

简介：摘要目的高温依赖蛋白HtrA的克隆表达，为进一步研究其结构与功能奠定基础。方法构建重组质粒pGEX-6P-1/HtrA，经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coliBL21中。结果构建了重组质粒pGEX-6P-1/HtrA，并在E.coliBL21菌中高效表达出相应分子量的GST-HtrA目的蛋白，表达了相对分子量（Mr）与预测分子量相近的可溶性蛋白。重组蛋白经GST树脂成功纯化。结论成功克隆表达了HtrA蛋白，为进一步研究其结构与功能奠定了基础。

简介：LH/CG受体是一种与G蛋白偶联的在哺乳动物生殖及性功能调节起重要作用的糖蛋白激素受体。介绍了鼠、猪及人等哺乳动物、鸟类、鱼类LH/CG受体基因及昆虫，无脊椎动物等LH/CG类受体的基因克隆表达及特性。

简介：目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten的原核表达体系，并于大肠杆菌中初步表达。方法从健康产妇胎盘组织中提取总RNA，经反转录．聚合酶链式反应扩增出Arresten基因，将基因克隆人克隆载体（pMD19-T）中，测序确认。酶切后插入表达载体pBV221，转入大肠杆菌JM109进行温控诱导表达，经蛋白质免疫印迹技术（Western-blot）检测Arresten蛋白的表达。结果酶切鉴定证实Arresten基因正确地插入表达载体中。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，重组体Arresten在大肠杆菌中获得表达，分子量约为26000，表达量约占菌体总蛋白的30％。经Westernblotting检测表明该异源重组蛋白具有添加的亲和纯化标签多聚组氨酸标签抗原活性。结论成功构建了有效的原核表达体系pBV221-Arresten。

简介：为了探索梨树植物的开花调控机制,本研究以砂梨（PyruspyrifoliaNakai）叶片为材料,采用同源序列克隆法,进行了开花调控相关基因CONSTANS的克隆,命名为PyCO,GenBank登录号为KF246572。序列分析表明,该基因包含一个1023bp的开放阅读框,编码340个氨基酸,推测蛋白质分子量为37.81kD,等电点为5.95。PyCO蛋白具有典型的植物CO家族的结构特征,含有2个高度保守的B-box及CCT结构域。进化树分析表明,该氨基酸序列与苹果的同源性接近93%,与碧桃、可可树、草莓等其他高等植物的CO类蛋白同源性也在70%以上。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白,分子量约为58.5kD,为进一步探索梨树开花调控机理奠定了基础。

简介：摘要目的通过分子生物学技术对结核分枝杆菌Rv0350基因克隆、表达与纯化。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv为模板，经聚合酶链式反应(PCR)扩增，克隆Rv0350基因，与质粒pET-28a连接构建重组质粒，转入大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍亲和层析获得纯化的重组蛋白。结果对扩增后的基因进行电泳试验，证实成功重组目的基因，对重组纯化后的蛋白进行考马斯亮染、Weston-blot验证已成功重组Rv0350。结论通过分子生物学技术可成功获得大量结核分枝杆菌Rv0350抗原，为后续功能与机理研究奠定基础。

简介：为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞（裸大麦）叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因（HvC4H）的全长cDNA序列（Genbank登录号：KF927086）,总长度1951bp,ORF为1518bp,编码505个氨基酸,等电点PI=9.01,平均亲水指数（GRAVY）为-0.170,属于亲水性碱性蛋白,高级结构分析表明其具有细胞色素P450家族保守域及C4H特异的功能性活性位点。利用实时荧光定量PCR分析胚乳发育5个时期不同组织（茎、叶及子粒）的表达情况,结果显示HvC4H基因在青稞胚乳发育期的表达情况存在着明显的组织差异性,在茎中的表达量最高。本研究为通过调控C4H基因的表达从而提高大麦黄酮的含量奠定了分子生物学基础,对于改良大麦的品质、抗性、生长发育等性状具有重要意义。

简介：目的克隆并表达人心肌肌钙蛋白I(cTnl)cDNA，为高效获得大量蛋白、制备抗体打下基础。方法采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)和分子生物学技术克隆人cTnI基因，重组构建pcDNA3-cTnI真核表达载体，转染人胚肾(HEK)293细胞，并用单克隆抗体检测特异性cTnI蛋白表达．结果克隆了cTnI的全长基因，构建了pcDNA3-cTnI真核表达载体并成功地在真核细胞中获得了蛋白表达结论所表达的蛋白证明具有正确的cTnI免疫原性，为规模化制备cTnI蛋白奠定了基础。

简介：胰岛素样生长因子2（insuline-likegrowthfactors2,IGF2）在脊椎动物的生长和发育中具有十分重要的作用.本研究利用分子克隆技术,从泰国斗鱼（Bettasplendens）雄鱼的肝脏组织中克隆鉴定出泰国斗鱼IGF2cDNA开放阅读框序列全长989bp,其中开放阅读框为629bp,共编码209个氨基酸残基.通过多重序列比对分析,泰国斗鱼IGF2的氨基酸序列与其他鱼类的IGF2具有较高的同源性,显示出序列的保守性.此外,利用RT-PCR检测IGF2在泰国斗鱼雌雄个体不同组织中的表达,结果表明IGF2在泰国斗鱼各组织中的表达具有显著的组织表达差异性,同样也存在着性别表达差异性.本研究结果为深入研究泰国斗鱼的igf2基因在生长发育中的调控机理提供研究基础.

简介：为探究荧光素酶编码基因表达产物发光特性,以青海弧菌基因组为模版扩增得到luxCDABE基因,构建表达载体pHSG396-luxCDABE。将载体导入大肠杆菌Top10,成功获得表达菌株Top10/pHSG396-luxCDABE（T-pluxCDABE）,测定重组菌株的表达活性,与实验室构建的菌株Top10/pHSG396-luxAB（T-pluxAB）发光情况进行比较。