简介:摘要目的探讨贝美前列素(BimP)对小鼠背部重构毛囊毛发生长的影响。方法自1日龄的新生C57BL/6J鼠皮肤分离培养表皮细胞和真皮细胞,用硅胶小室法在Balb/c-nu小鼠背部重构毛囊,术后将18只Balb/c-nu小鼠随机分为BimP组、米诺地尔组和对照组,每组各6只;2周后在小鼠背部的细胞移植区分别外涂0.03% BimP 100 μl、2%的米诺地尔溶液100 μl和生理盐水100 μl,每天涂药1次,连续2周;观察局部毛发生长情况;取小鼠背部移植区皮肤的新生毛发测量其长度;组织学观察新生毛囊的数目与生长周期;用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测Wnt家族分泌蛋白3a(Wnt3a)、淋巴细胞增强因子(LEF1)、β-环连蛋白和Frizzled跨膜受体蛋白7(Frizzled7)mRNA和蛋白表达水平。免疫荧光检测毛囊细胞β-环连蛋白的分布与表达。结果BimP组毛干长度高于对照组[(0.57±0.07)比(0.36±0.05) cm,P<0.01],BimP组与米诺地尔组差异无统计学意义;BimP组毛囊细胞Wnt3a (2.73±0.17比1.00±0.14,P<0.01)、LEF1(1.71±0.12比1.00±0.19,P<0.01)、β-环连蛋白(2.37±0.21比1.00±0.11,P<0.01)和Frizzled7(2.62±0.15比1.00±0.18,P<0.01) mRNA表达水平均高于对照组;Western印迹结果相同,BimP组毛囊细胞Wnt3a (1.44±0.21比1.00±0.13,P<0.05)、LEF1 (1.36±0.15比1.00±0.09,P<0.05)、β-环连蛋白 (1.60±0.13比1.00±0.16,P<0.01)和Frizzled7 (1.52±0.15比1.00±0.21,P<0.05)蛋白表达水平均高于对照组。免疫荧光染色发现β-环连蛋白在BimP组和米诺地尔组新生毛囊的毛球细胞和皮脂腺细胞强表达,而对照组几乎未见荧光染色存在。结论BimP可通过激活经典Wnt/β-环连蛋白信号通路促进小鼠重构毛囊的毛发生长。
简介:摘要目的探讨Wnt/β-连环链蛋白(catenin)/TCF-4通路在肾癌细胞中的作用,并初步分析其可能的机制。方法分别构建β-catenin sh和TCF-4△Nsh的真核表达载体,并分别转染肾癌786-O细胞,采用CCK8检测转染后细胞的增殖能力,吖啶橙-溴乙锭(AO-EB)染色法检测转染后细胞死亡情况,Western印迹检测转染组、空转组以及空白组细胞TCF-4、Bcl-2、bax、Caspase-3的表达情况。结果转染β-catenin siRNA病毒后,细胞的增殖能力较空转组明显降低(0.443±0.145与0.910±0.721),细胞死亡率较空转组明显增加(16.38±5.32与6.61±1.04),TCF-4的表达受抑制、凋亡蛋白Caspase 3、bax表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减低(均P<0.05)。转染TCF-4 siRNA病毒后,细胞的增殖能力较对照组明显降低,细胞死亡率较对照组明显增加,TCF-4的表达受抑制导致凋亡蛋白Caspase 3、bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减低(均P<0.05)。结论Wnt/β-catenin/TCF-4通路在786-O肾癌细胞中具有可调节肾癌细胞的增殖和凋亡的作用,其机制可能为通过调节其下游的凋亡蛋白Caspase 3、bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平来实现。
简介:摘要目的探讨 整合素A5(ITGA5)在胃癌(GC)中的生物学作用和潜在机制。方法2019年1月至2020年12月,从浙江省人民医院接受手术切除的胃癌患者中收集35例胃癌组织[男21例,女14例,年龄(53.8±5.4)岁]以及35例匹配的癌旁组织,从北京百欧博伟生物技术公司购买胃癌和正常胃黏膜细胞。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫组织化学、Western印迹法检测胃癌细胞中ITGA5、细胞黏附相关基因pFAK、pSrc、aRac1的mRNA和蛋白表达情况。细胞增殖检测(CCK-8)、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、细胞黏附实验检测胃癌细胞的表型。结果与正常胃黏膜细胞比较,ITGA5在胃癌细胞中高表达(1.00±0.26与1.23±0.27,P<0.05)。并且过表达ITGA5后能够通过FAK/Src/Rac1通路促进胃癌细胞增殖,吸光度(A)值由1.14±0.14升至1.61±0.14、迁移能力由(20.3±2.3)%提升至(56.4±6.1)%、侵袭能力由144.0±4.6提升至216.7±6.6,并增强与基质蛋白的黏附能力(99.0±8.5提升至152.0±12.3)(均P<0.05)。结论ITGA5在胃癌中高表达并作为促癌因子发挥作用,为寻找胃癌潜在治疗靶点提供了理论依据。
简介:摘要目的明确氟中毒大鼠生殖损伤状态下的氧化应激和内质网应激水平,并观察α-硫辛酸(α-LA)干预后各相关指标的变化,探讨α-LA在氟中毒大鼠生殖损伤中的作用及可能机制。方法将40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字法分为四组,分别为对照组(0.9%氯化钠);α-LA组(100 mg/kg α-LA);氟化钠(NaF)组(25 mg/kg NaF);NaF和α-LA联合作用组(25 mg/kg NaF+100 mg/kg α-LA)。采用灌胃的方式染毒,染毒8周后,各组分别进行精子质量分析、睾丸氟含量测定及HE染色;TUNEL法检测睾丸组织细胞凋亡;生化法测定氧化应激相关指标;Western印迹检测睾丸组织中GRP78、PERK及CHOP的蛋白表达水平。结果与对照组相比,NaF组的精子密度及精子存活率较低[(5.99±1.45)×106/ml比(10.96±1.83)×106/ml,P<0.01;(33.40±2.71)%比(66.41±3.33)%,P<0.01],精子畸形率较高[(26.43±2.43)%比(11.44±1.55)%,P<0.01)];与NaF组相比,NaF+α-LA组的精子密度及精子存活率较高[(8.47±0.82)×106/ml比(5.99±1.45)×106/ml,P<0.05;(49.97±3.51)%比(33.40±2.71)%,P<0.05],而精子畸形率较低[(22.69±2.39)%比(26.43±2.43)%,P<0.05]。与对照组相比,NaF组的睾丸氟含量较高[(11.14±0.77)μg/g比(5.78±0.28)μg/g,P<0.01]。光学显微镜下可见NaF组的生精细胞间结构较为疏松,生精细胞和成熟精子数量减少,与α-LA联合作用后,生精细胞结构损伤有所改善,管腔脱落细胞减少。TUNEL检测发现,NaF组的凋亡指数较高[(61.32±7.14)%比(6.99±2.17)%,P<0.01];与NaF组相比,NaF+α-LA组细胞凋亡指数较低[(45.96±5.31)%比(61.32±7.14)%,P<0.01]。氧化应激水平检测发现,与对照组相比,NaF组的丙二醛(MDA)较高[(5.46±0.30)nmol/mgprot比(3. 24±0.58)nmol/mgprot,P<0.01],超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)较低[(6.04±0.71)U/mgprot比(7.19±0.52)U/mgprot,P<0.01;(23.67±0.99)U/mgprot比(26.91±1.67)U/mgprot,P<0.01];与NaF组相比,NaF+α-LA组MDA较低[(4.66±0.70)nmol/mgprot比(5.46±0.30)nmol/mgprot,P<0.05],GSH-Px较高[(25.90±1.93)U/mgprot比(23.67±0.99)U/mgprot,P<0.05]。内质网应激水平检测发现,与对照组相比,NaF组的GRP78、PERK和CHOP蛋白表达水平明显上调(0.79±0.05比0.45±0.09,P<0.01;0.71±0.04比0.40±0.05,P<0.01;0.79±0.09比0.19±0.08,P<0.01),与NaF组相比,α-LA抑制了NaF介导的GRP78和CHOP蛋白表达上调(0.46±0.06比0.79±0.05,P<0.01;0.52±0.09比0.79±0.09,P<0.01)。结论α-LA可通过抑制氧化-内质网应激信号通路,对氟中毒大鼠生殖损伤起到一定的保护作用。
简介:探讨汉黄芩素对急性白血病HL-60细胞增殖及其可能的作用机制.以不同浓度(10,20,40,80,100μmol/L)的汉黄芩素分别作用于HL-6024,48,72h后,采用MTT法检测其对细胞增殖活性的影响;台盼蓝拒染法观察汉黄芩素作用HL-60细胞48h后,对细胞活力的影响;Westernblot法检测汉黄芩素对HL-60细胞中PI3K/AKT/mTOR和Raf/MEK/ERK信号通路中相关蛋白的表达.结果表明:汉黄芩素能够显著抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性.此外,汉黄芩素对PI3K/AKT/mTOR信号通路中p-PI3K、pAKT、mTOR和p-mTOR蛋白表达具有明显的抑制作用;对Raf/MEK/ERK信号通路中的MEK、ERK蛋白表达增加,抑制ERK1/2的磷酸化水平.汉黄芩素抑制HL-60细胞增殖和逆转耐药性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达和下调Raf/MEK/ERK信号通路中ERK磷酸化水平有关.
简介:通过游泳训练诱发大鼠Th1/Th2失衡,观察和分析JAK2/STAT4通路及其上游因子在该失衡发展过程中的变化规律,探讨大运动量训练导致Th1/Th2失衡的分子机制。将清洁级16周龄雄性SD大鼠随机分为安静对照组(C组)、游泳训练组(T组),每组根据取材时间不同又随机分为24h组与7d组。训练采用4周递增负荷游泳训练方法。WesternBlotting法测定心脏血淋巴细胞pJAK2、pSTAT4、JAK2、STAT4的蛋白表达,ELISA法检测心脏血血浆IFN-γ、IL-4、IL-12值。结果发现:(1)T组大鼠血浆IFN-γ、IFN-γ/IL-4与IL-12(P〈0.01)水平均显著低于C组(P〈0.01)、(P〈0.05)。C组与T组大鼠血浆IL-12与IFN-γ的质量浓度显著相关(P〈0.01)。(2)T组大鼠血淋巴细胞pJAK2、pSTAT4蛋白表达均显著低于C组(P〈0.05)、(P〈0.01)。结果说明4周递增负荷训练可能通过减少IL-12的分泌,抑制JAK2/STAT4信号通路中关键因子JAK2、STAT4的磷酸化过程,降低Th1类细胞因子IFN-γ的合成,诱发Th1/Th2失衡。
简介:摘要目的探讨miR-223对大鼠心肌细胞纤维化相关通路的保护作用及对Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)、转化生长因子β1受体2(TGFBR2)的表达调控。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,以TGF-β人工诱导心肌细胞纤维化相关通路活化,分为模型组、miR-223组(转染miR-223过表达慢病毒)以及miR-223-NC组(转染miR-223-NC慢病毒),同时设立正常细胞对照组。免疫组化检测α-SMA的表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)测定心肌细胞miR-223、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平;Western印迹法检测心肌细胞Twist1、TGFBR2、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ及α-SMA蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-223对Twist1、TGFBR2 3′UTR的靶向调控。结果miR-223组α-SMA阳性心肌细胞平均吸光度(0.089±0.013)明显低于模型组和miR-223-NC组(0.134±0.018,0.132±0.016);miR-223组心肌collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平与模型组及miR-223-NC组比较显著下降,且差异具有统计学意义(P<0.05);Twist1、TGFBR2、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ及α-SMA蛋白水平较模型组及miR-223-NC组显著下降,且差异具有统计学意义(P<0.05);Twist1、TGFBR2 3′UTR野生型双荧光素酶报告质粒与miR-223 mimics共转染293T细胞,荧光素酶活性均显著降低[(0.48±0.06,0.51±0.07)比(0.92±0.17,0.94±0.12)]。结论miR-223可能通过下调Twist1、TGFBR2基因的表达抑制心肌细胞中纤维化相关信号通路活化。