简介:摘要目的评价快速重组酶介导的等温扩增技术(RAA)在采供血机构沙门菌生物学监测中的应用。方法加热快速裂解肠炎沙门菌标准菌株提取DNA,采用沙门菌RAA荧光型检测试剂在小型Genchek荧光检测仪内37 ℃条件下识别并扩增沙门菌的特异基因片段,20 min内实时读取荧光检测值,根据扩增曲线判定结果。评估RAA法的检测灵敏度,同时采用RAA法检测13个标准菌株和5个实验室分离的沙门菌株验证其特异性。采集51份样本,分别接种肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌标准菌株,以及无沙门菌污染的空白对照,营养琼脂平板培养48 h计数菌落数,同时采用国标GB 4789.4—2016的方法和RAA法进行沙门菌检测。结果RAA法在37 ℃ 20 min的条件下对肠炎沙门菌的最低检出限为1.9×102 CFU/mL,和非沙门菌无交叉反应。使用中消毒液和血液运输箱内壁沙门菌生物学的检测结果与国标法相同,Kappa值均为1。结论RAA技术可快速、灵敏、特异性地检测沙门菌,可应用于采供血机构沙门菌的生物学监测。
简介:摘要目的探讨吴茱萸热奄包热熨法联合耳穴压豆对肾绞痛患者的影响。方法选取广州市白云区第二人民医院自2017年1月至2018年1月122例肾绞痛患者,按照随机数表法分为研究组和对照组,各61例。研究组采用解痉药品加吴茱萸热奄包热熨法联合耳穴压豆,对照组采用解痉药品加吴茱萸热奄包热熨法。对比两组护理效果、疼痛程度、疼痛开始缓解时间、护理满意度。结果研究组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。护理前两组疼痛评分比较差异无统计学意义(P>0.05),护理后两组疼痛评分均下降,护理后研究组疼痛评分、疼痛开始缓解时间、肾绞痛发作次数均明显少于对照组,护理满意度高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论吴茱萸热奄包热熨法联合耳穴压豆应用于肾绞痛患者护理中疗效显著,减轻患者疼痛程度,减少肾绞痛发作次数,提高护理满意度,值得推广应用。
简介:摘要目的利用差示扫描量热法(DSC)与傅里叶红外光谱法(FT-IR)分析乳香、没药的差异性。方法收集不同产地、炮制法的乳香、没药,考察升温范围、升温速率、粒度大小3个因素对DSC试验条件的影响,并在该条件下应用差示扫描量热仪对乳香、没药进行差热图谱扫描、分析;应用傅里叶变换红外光谱仪对20批乳香、没药进行扫描与对比分析。结果得到DSC试验的最佳条件:升温范围30~600 ℃,升温速率30 ℃/min,粒度100目。乳香、没药的DSC图谱存在明显差异,在297 ℃附近只有乳香各炮制品出现吸热峰,没药各炮制品此温度区间无特征峰;二者在326 ℃放热峰位置接近,但焓值差异较大;100 ℃附近的吸热峰位置和峰形大小接近。FT-IR图谱显示,波数2 925、1 710、1 454、1 371、1 242、1 029 cm-1乳香、没药均出现吸收峰,强峰位置相近。没药波数1 029 cm-1的特征峰强度较乳香特征峰大。结论乳香、没药的DSC谱图存在明显差异,特征峰数量不同,焓值不同;乳香、没药FT-IR谱图二者差异较小,采用DSC鉴别树脂类中药材优于FT-IR,值得进一步推广使用。
简介:摘要目的建立实时荧光环介导等温扩增(Real-time Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术检测皮肤癣的方法,实现皮肤癣菌病的快速实验室诊断。方法通过在NCBI官网查找下载皮肤癣菌中毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属临床分离率较高的菌种rRNA序列(18S rRNA, ITS1, 5.8S rRNA, ITS2和28S rRNA),运用DNASTAR Lasergene软件进行分析比对,寻找出毛癣菌属内高度保守的靶序列,且该段靶序列要与其他属存在差异,运用Primer Explorer V5设计LAMP引物。提取须癣毛癣菌NBRC6202基因组DNA作为模板筛选引物以及建立LAMP检测毛癣菌属的反应体系,以红色毛癣菌ATCC28188基因组DNA作为模板测试其敏感性和稳定性,以毛癣菌属以外的其他真菌、细菌基因组DNA验证LAMP反应体系的特异性。结果筛选的4套引物里,primer2的扩增效果较好,可在22 min检测出须癣毛癣菌,且可以特异地检测出红色毛癣菌、指间毛癣菌、疣状毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌。本研究建立的毛癣菌属RT-LAMP检测方法的最低检测限为1 pg/μL;在10 000 pg/μL、100 pg/μL和1 pg/μL三个浓度的分别10次重复检测实验中平均CT值和CV%分别为9.24±0.30,3.29%、10.57±0.54,5.12%、15.95±0.52,3.24%。结论实验建立的毛癣菌属LAMP检测方法在特异性、敏感性和稳定性三方面均表现出优越的性能,能快速准确地检测出毛癣菌属常见菌种,具有良好的临床应用前景。
简介:摘要目的分析间接测热法、Harris-Benedict(H-B)公式法和拇指法计算急性胰腺炎(AP)患者每日总能量消耗(TDEE)的一致性,为制定合理的营养支持方案提供依据。方法回顾分析2020年6月至12月就诊于河南省人民医院的66例AP患者资料,其中男性35例,女性31例,平均41.8岁。依据严重程度分为轻症急性胰腺炎(MAP)组(n=20)和中重症AP组(n=46)。根据间接测热法、H-B公式法和拇指法计算TDEE,分别采用Pearson相关分析和Bland-Altman图分析三种方法的相关性和一致性。结果间接测热法、H-B公式法、拇指法计算MAP组的TDEE比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中重度AP组,根据间接测热法计算的TDEE均高于H-B公式法和拇指法的计算值,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析显示H-B公式法与间接测热法计算的TDEE呈正相关,相关系数为0.61(P<0.05),应用Bland-Altman绘图分析两种方法具有较好的一致性。拇指法与间接测热法计算的TDEE呈正相关,相关系数为0.75(P<0.05),应用Bland-Altman绘图分析两种方法一致性较好。结论对于MAP患者,可采用H-B公式法和拇指法计算TDEE。而中重度AP患者宜通过间接测热法计算TDEE,作为营养支持方案制定的依据。
简介:摘要目的观察通腑泄热法中药对兔肝部分切除术后肝功能的影响。方法选用新西兰白兔25只,以随机数字表法随机分为3组,即中药组(TCM组,n=10),对照组(Control组,n=10),假手术组(Sham组,n=5),制备兔肝部分切除模型20例和假手术模型(切开腹壁后关腹)5例,分别于术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天,检测各组兔血清中过氧化氢酶(CAT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)的含量水平。多组间样本比较采用单因素方差分析,组间两样本比较采用独立样本t检验。结果术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天,中药组CAT的含量分别为(6.34±0.61)、(4.44±0.72)、(5.09±0.36)、(6.18±0.62) U/ml;对照组CAT的含量分别为(6.08±0.80)、(4.48±0.72)、(4.64±0.49)、(5.05±0.39) U/ml;假手术组CAT的含量分别为(6.34±0.64)、(6.31±0.52)、(6.33±0.42)、(6.36±0.31) U/ml。中药组ALT的含量分别为(25.67±2.97)、(38.65±3.14)、(33.30±2.33)、(26.95±1.74) U/L;对照组ALT的含量分别为(26.04±2.13)、(36.02±4.08)、(35.70±1.96)、(32.55±4.68) U/L;假手术组ALT的含量分别为(25.13±2.19)、(25.22±2.87)、(25.06±2.21)、(24.04±1.39) U/L。中药组AST的含量分别为(18.61±1.79)、(29.31±2.78)、(25.95±3.33)、(19.76±1.91) U/L;对照组AST的含量分别为(17.32±2.21)、(28.00±3.76)、(27.29±2.78)、(26.05±2.41) U/L;假手术组AST的含量分别为(18.27±2.15)、(18.92±2.41)、(18.87±1.89)、(18.54±2.28) U/L。中药组ALB的含量分别为(51.31±5.43)、(41.08±1.96)、(45.40±2.43)、(48.74±3.26) g/L;对照组ALB的含量分别为(52.14±4.36)、(42.99±4.16)、(45.33±3.71)、(43.74±2.95) g/L;假手术组ALB的含量分别为(50.05±4.23)、(51.18±4.11)、(51.10±2.93)、(51.50±3.34) g/L。CAT、ALT、AST、ALB的含量变化,术前各组间差异无统计学意义(CAT,t=0.815、-0.003、-0.633;ALT,t=-0.322、0.357、0.775;AST,t=1.443、0.325、-0.798;ALB,t=-0.377、0.451、0.881,P值均>0.05)。术后第1天中药组和对照组ALT、AST水平明显升高,CAT、ALB水平明显下降,与假手术组比较,差异有统计学意义(ALT,t=8.017、5.257;AST,t=7.095、4.870;CAT,t=-5.119、-5.024;ALB,t=-6.589、-3.612,P<0.05),中药组和对照组间差异无统计学意义(CAT,t=-0.136;ALT,t=1.617;AST,t=0.883;ALB,t=-1.314,P值均>0.05)。术后第5天中药组和对照组ALT、AST都有所下降,CAT、ALB都有所升高,中药组变化更为显著,中药组和对照组间差异有统计学意义(ALT,t=-3.548;AST,t=-6.478;CAT,t=4.896;ALB,t=3.601,P值均<0.05)。结论通腑泄热法中药可明显减轻兔肝部分切除后术后肝损伤,可能是通过升高CAT水平,减少肝部分切除术后氧自由基的产生,从而保护兔肝部分切除术后肝功能。
简介:摘要目的建立简便快捷的差示扫描量热法(differential scanning calorimetry, DSC)用于鉴别不同胶类中药饮片及配方颗粒。方法采用DSC法,样品粒度100目,以铝坩埚为参照物,氮气为气氛,流速100 ml/min,考察最佳升温范围和升温速率。以优化后的DSC试验条件,鉴别42批次的阿胶、鹿角胶、龟甲胶饮片及配方颗粒。结果DSC试验最佳升温范围30~500 ℃,升温速率30 ℃/min。DSC谱图显示,阿胶饮片、鹿角胶饮片、龟甲胶饮片分别有4、3、2个特征峰,且三者特征峰峰形、位置均有明显不同;鹿角胶配方颗粒与龟甲胶配方颗粒均有2个放热峰数,但两者特征峰位置不同,阿胶配方颗粒只有1个放热峰。鹿角胶的中药饮片及配方颗粒在325 ℃左右共同出现一放热峰,可作为鹿角胶的特征峰。结论DSC法具有操作简便、用量少、无需试剂、测量快速、重现性好、谱图易解析等优点,可通过DSC谱图中特征峰数量、位置、峰形和焓值大小等快速鉴别区分各种胶类饮片及配方颗粒。
简介:摘要目的建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物,经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价,并与实时荧光定量RT-PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法进行比较。结果基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测,检测限为3 copies/reaction,与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性,具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证,RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强,适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测,具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。
简介:摘要目的运用逆转录解旋酶等温扩增(RT-tHDA)和侧流层析技术,建立新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测新方法。方法收集2020年1至4月东部战区总医院基础医学实验室共143份2019-nCoV PCR阴性核酸标本和20份PCR阳性核酸标本。针对2019-nCoV N基因和E基因保守区序列各设计5对引物,扩增产物进行凝胶电泳分析,筛选出RT-tHDA最佳引物。分别扩增高浓度(5×105 拷贝/ml)、低浓度(5×102拷贝/ml)模拟标本,利用侧流层析试纸条(LFD)检测RT-tHDA扩增产物,使结果可视化。优化显色和扩增时间,建立tHDA-LFD最佳反应体系。该方法检测各低、中、高3种浓度的模拟标本15次,以阳性符合率来评估方法学精密度。制备模拟标本评价方法学检测限。分别检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒229E,评价tHDA-LFD法的交叉反应性。采用tHDA-LFD法检测本实验室收集保存的163份标本,进行临床诊断效能评价。结果采用一步法RT-tHDA结合LFD,建立扩增时间为60 min的2019-nCoV核酸检测方法。该方法检测3种浓度的模拟标本,阳性符合率为100%,精密度和重复性较好,且与其他6种呼吸道病原体均未出现交叉反应。该方法检测N基因、E基因的最低检测限均为5×102 拷贝/ml。诊断效能评价结果显示,该法敏感度为95.00%(19/20),特异度为100.00%(143/143),阳性预测值为100.00%(19/19),阴性预测值为99.31%(143/144)。和金标准qPCR法相比,两种方法的Kappa值为0.971(P<0.000 1),一致性较好。结论本研究成功建立了基于tHDA-LFD法的2019-nCoV可视化检测方法。
简介:摘要目的建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)技术检测寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的方法,以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法通过基因组序列比对,选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针,并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性,通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果建立的RT-RAA方法可在39 ℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增,检测系列稀释的ZIKV重组质粒,其95%检测限可达到15拷贝/反应,特异性强,与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应,且重复性好。结论本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法,具有反应迅速,无需精密仪器,操作简单等优点,适合于应急快速检测。
简介:摘要收集2019年2月至2021年1月,采用右美托咪定行以病人自控睡眠为主线的多模式睡眠疗法的睡眠障碍病人的病历资料,年龄≥18岁,BMI 18~30 kg/m2,性别不限。采用微量注射泵以60 ml/h(4 μg/ml)的速率静脉输注右美托咪定,进入非快速眼动(NREM)Ⅲ期睡眠或达到1 μg/kg后停止输注。参照《中国不宁腿综合征的诊断与治疗指南(2021版)》的诊断标准,判断右美托咪定是否诱发了不宁腿综合征(RLS)。滴定结束待病人清醒后次日,按照《中国不宁腿综合征的诊断与治疗指南(2021版)》的诊断标准进行临床诊断确定是否合并RLS。采用Kappa一致性检验评估右美托咪定滴定和《中国不宁腿综合征的诊断与治疗指南(2021版)》的诊断标准判断RLS的一致性。计算右美托咪定滴定判断RLS的灵敏度和特异度。共纳入39例病人,经右美托咪定滴定判断8例病人出现RLS症状。Kappa一致性检验结果表明,右美托咪定滴定和《中国不宁腿综合征的诊断与治疗指南(2021版)》的诊断标准判断RLS具有较强的一致性(Kappa值1.0,P<0.01)。右美托咪定滴定法判断RLS的灵敏度为100%,特异度为100%。综上所述,右美托咪定滴定可准确地判断RLS。
简介:目的:对比分析舒芬太尼与吗啡快速皮下滴定治疗晚期难治性癌痛的疗效。方法:选取我院2021年03月至2022年06月收治的120例晚期难治性癌痛患者,随机分为实验组与对照组,每组60例。对照组应用吗啡进行快速皮下滴定治疗,实验组应用舒芬太尼进行快速皮下滴定治疗,对比疼痛缓解情况与不良反应发生率。结果:两组患者用药后疼痛评分(NRS)对比显示无明显差异(P>0.05),实验组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论:晚期难治性癌痛患者应用舒芬太尼进行快速皮下滴定治疗,可有效减轻患者的疼痛程度,具有较高的安全性,但不建议长期应用到晚期癌痛患者的治疗中。