简介：摘要目的利用朊病毒感染细胞模型，探索朊病毒清除过程中外泌体内蛋白的差异表达。方法利用同位素标记相对与绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术，分别从朊病毒感染细胞系SMB-S15、对照细胞系SMB-PS以及暴露于白藜芦醇4 d(RES4)和8 d(RES8)的SMB-S15细胞中提取外泌体，并对这些提取的外泌体中蛋白进行蛋白质组学分析。结果从4种细胞来源的外泌体中总计检出4 809种蛋白质，随着朊病毒的清除，外泌体中蛋白质变化多样，其中下调蛋白略多于上调蛋白。可能涉及的重要通路包括帕金森综合症、阿尔兹海默症和亨廷顿病等神经退行性疾病相关通路。结论在用白藜芦醇和硫酸戊糖清除朊病毒过程中，随着朊病毒的清除，细胞间外泌体中蛋白质随之发生变化，提示外泌体可能参与朊病毒在细胞间的传递。

简介：摘要近年来，新型冠状病毒肺炎、流行性感冒、埃博拉出血热等病毒性疾病呈现愈演愈烈、愈发愈快的趋势。为保障人民健康和国民经济的稳定运行，研究病毒的致病机理与宿主免疫调控机制，解析病毒与宿主的基因表达调控规律，监测病原病毒与防治病毒病的重要性逐渐凸显。转录组测序是一类在RNA水平上关注基因在特定时空状态下表达特征的技术，是分析差异基因表达和研究mRNA差异剪接必不可少的工具。随着分子生物学实验技术的进步和生物信息学分析平台的成熟，转录组学研究向着低成本、低技术门槛的方向发展，逐渐从理论研究领域向临床实验室过渡，改变着临床工作人员对病毒与病毒病的传统认知，被越来越多的用于病毒转录机制、病毒与宿主的免疫互作、追踪疾病进展以及抗病毒药物研发等方面研究。本文主要对宏转录组的技术流程、常用软件以及病毒与病毒病方向的应用场景进行综述，并对细胞群转录组、单细胞转录组、单细胞核转录组以及空间转录组的方法与应用进行简要介绍，以期为病毒转录机制研究与病毒病的防控提供方法学参考。

简介：摘要目的建立针对发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)、登革病毒(dengue virus, DENV)、汉滩病毒(hantaan virus，HTNV)三种常见病毒性出血热病毒的现场应急快速检测方法。方法基于传统的TaqMan荧光探针技术，利用国产快速一步法RT-PCR试剂盒，结合magnetic induction cycler (Mic) qPCR仪，建立三种常见病毒性出血热病毒的快速荧光定量RT-PCR检测方法。利用三种病毒体外转录RNA及模拟样本、其他相关病毒临床样本及健康人血标本进行灵敏度、特异性、重复性验证。结果相较于传统的实时荧光定量RT-PCR方法，此方法所需时间大大缩短，可在35 min内完成检测。SFTSV、DENV、HTNV的最低检出限均小于100拷贝/PCR，与模拟对照样本及其他病毒临床样本无交叉反应，模拟阳性样本验证均可检出，且各组验证结果的Ct值变异系数均小于4%。结论本研究建立的快速荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性。对于现场应急检测和媒介生物标本筛查具有一定的应用前景。

简介：摘要目的结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)、登革病毒(dengue virus，DENV)、黄热病毒(yellow fever virus，YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)的快速核酸检测方法，以实现这4种病毒感染的快速诊断。方法以ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因以及CHIKV的E1基因作为靶序列设计4组特异性引物探针；用体外转录RNA评价方法的灵敏性；用其他病毒核酸评价方法的特异性；ZIKV、YFV、CHIKV检测方法采用模拟阳性样本，DENV检测方法采用临床患者标本进行验证，并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果ZIKV、DENV、YFV、CHIKV4种方法的最低检出限分别是14.57拷贝/μl、94.27拷贝/μl、8.25拷贝/μl、223.19拷贝/μl；4种检测方法与其他病毒核酸无交叉反应；ZIKV、YFV、CHIKV模拟阳性样本检出率为100%，各浓度检测Ct值的变异系数均在2%左右；20份DENV临床患者标本检出率为100%，与传统荧光定量RT-PCR检测方法结果一致。结论本研究建立的ZIKV、DENV、YFV、CHIKV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性、稳定性，25 min内即可完成1次检测，可适用于现场实验室检测与早期诊断。

简介：摘要1972年，诺如病毒被发现，此后被确认为全球急性胃肠炎散发病例及暴发的主要病因之一，成为全球性的公共卫生问题。50年来，人们对诺如病毒感染的临床特征、流行病学特征、病原特征等有了较深入认识，但迄今未能建立有效的体外培养和实验动物模型，导致其感染和致病机制研究受限，也无特异的疫苗和药物上市。随着轮状病毒疫苗的全球普及，诺如病毒成为继轮状病毒后又一亟待控制的重要公共卫生问题。

简介：摘要

简介：摘要目的了解乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)合并人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染对抗反转录病毒治疗(anti-retroviral therapy, ART)效果的影响。方法纳入2016年9月至2019年10月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的269例HIV感染者，将其分为HIV单独感染组和HBV合并HIV感染组，比较2组患者ART启动时和ART后不同时间点(2、4、8、12、24、36、48和96周)的肝功能、CD4+T淋巴细胞计数、HIV RNA变化情况。统计学分析采用独立样本t检验、秩和检验和χ2检验。结果HIV单独感染组145例，HBV合并HIV感染组124例。ART启动时两组患者肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(t＝9.566)、丙氨酸转氨酶(t＝-4.652)、总胆红素(t＝-25.476)]差异均无统计学意义(均P>0.05)。ART后24、48和96周时，HIV单独感染组与HBV合并HIV感染组CD4+T淋巴细胞计数分别为(305.9±156.9)/μL比(266.2±172.5)/μL、(388.5±226.1)/μL比(380.8±287.4)/μL、(369.5±191.4)/μL比(453.6±179.6)/μL；ART后48、72和96周时，CD4+T淋巴细胞计数增长值为121.0(-52.5, 144.5)/μL比156.0(-35.8，185.8)/μL、139.0(-116.0，176.8)/μL比114.5(-59.5, 229.0)/μL、-91.0(-110.0, 153.3)/μL比-94.0(-130.8, 114.3)/μL，差异均无统计学意义(t＝-0.516、-0.066、-1.414、Z＝-1.715、-0.802、-1.602，均P>0.05)。ART后24、48和96周时，HIV单独感染组的HIV RNA抑制率分别为89.7%(130/145)、96.6%(140/145)和96.6%(140/145)，HBV合并HIV感染组分别为87.1%(108/124)、92.7%(115/124)和94.4%(117/124)，差异均无统计学意义(χ2＝0.026、0.053、0.017，均P>0.05)。ART后第2周、第4周HIV单独感染组肝功能异常率分别为3.4%(5/145)、6.2%(9/145)，低于HBV合并HIV感染组的21.0%(26/124)、13.7%(17/124)，差异均有统计学意义(χ2＝20.121、4.309，均P<0.05)；而第8周[10.3%(15/145)比9.7%(12/124)]、第12周[9.0%(13/145)比9.7%(12/124)]、第24周[9.7%(14/145)比8.9%(11/124)]、第36周[9.7%(14/145)比10.5%(13/124)]、第48周[8.3%(12/145)比8.1%(10/124)]、第96周[2.8%(4/145)比0(0/124)]的肝功能异常率差异均无统计学意义(χ2＝0.330、0.040、0.049、0.051、0.004、3.472，均P>0.05)。结论合并HBV感染对HIV感染者的ART效果无不良影响。

简介：摘要目的建立可检测杜贝病毒（dugbe virus，DUGV）、盖勒尤卜病毒（qalyub virus，QALV）和蒂亚福拉病毒（thiafora virus，TFAV）等三种内罗病毒基因组的实时荧光RT-PCR检测方法。方法收集、整理，比对、分析在公共数据库发布的三种病毒基因组S节段核苷酸序列，确定检测靶标，利用生物信息软件设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒靶标RNA，检测限分别为160 copies/μL，20 copies/μL和10 copies/μL，检测科萨努尔森林病病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，三种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性分析显示变异系数均在2%以内。结论本研究建立的检测DUGV、QALV和TFAV的实时荧光RT-PCR方法，可用于相关临床样本、媒介、宿主动物标本以及进出口物品筛查检测。

简介：摘要2019年底的新冠疫情加速了全球各研究机构对新冠疫苗的研发。正在进行临床试验的多种技术平台的新冠疫苗中，重组病毒载体类疫苗表现出较好的免疫原性优势和效力，但同时出现的疫苗安全性和载体预存抗体等问题也不容忽视。本文将概述重组载体疫苗的设计理念和发展历程，梳理当前不同重组病毒载体新冠疫苗的临床研究进展，并阐述其面临的主要挑战和未来的发展方向，以期为重组载体类疫苗的研究提供借鉴。

简介：摘要蝙蝠是唯一会飞行的哺乳动物，种类繁多，分布广泛，是多种病毒的自然储存宿主。2019年12月以来新型冠状病毒肺炎COVID-19以及其病原体SARS-CoV-2的发现，再次引发人们对蝙蝠冠状病毒的关注。本文对蝙蝠来源冠状病毒与人冠状病毒的关系进行综述。

简介：摘要新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情暴发以来，为了探索安全有效的抗新型冠状病毒（2019-nCoV）药物，全球已开展了多项临床研究。这些研究主要针对体外实验具有抗2019-nCoV活性的药物及以往用于治疗SARS和中东呼吸综合征的药物，包括瑞德西韦、洛匹那韦/利托那韦、氯喹、羟氯喹、阿比多尔、干扰素和利巴韦林等。本文综述了近来有关抗2019-nCoV药物的临床研究，但目前的研究结果均缺乏一致性，尚不足以构成这些药物治疗COVID-19有效性和安全性的证据。在缺乏特效药物治疗的情况下，对于病情危重或进展过快者可试用瑞德西韦。一部分临床研究尚在进行中，我们期待更多的大样本、多中心临床研究为临床提供安全有效的抗病毒治疗证据。

简介：摘要新型冠状病毒肺炎造成全球大流行，但目前尚无特效治疗药物。大量临床研究结果显示，瑞德西韦、洛匹那韦利托那韦等多种抗病毒药物可能有效，但尚无充分证据证明某种药物可改善患者的预后。恢复期血浆对重症及危重症患者的治疗具有重要价值。未来应进行其他抗病毒药物疗效的临床研究。

简介：摘要目的构建并拯救增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)标记的EGFP-EV-A71重组病毒。方法利用重叠PCR技术，以pMD19T-SDLY107全长质粒为模板，将2A蛋白酶识别序列加入到结构蛋白VP4的5′端；以pEGFP-N1质粒作为模板，扩增获得EGFP目的片段，将其插入到上述重组质粒中，得到重组质粒pMD19T-107-EGFP。经酶切和体外转录后，转染横纹肌细胞肉瘤(RD)，拯救获得重组病毒EGFP-EV-A71。采用Karber法计算细胞培养半数感染量(CCID50)以测定病毒滴度。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同时间点的病毒复制水平，并绘制病毒复制曲线，比较重组病毒与母本病毒的复制力有无差异。乳酸脱氢酶(LDH)和细胞增殖(CCK-8)实验分别测定被感染细胞的细胞损伤率和存活率。结果包含EGFP的重组EV-A71感染性cDNA克隆被成功构建；转染RD细胞后，出现典型的细胞病变并且表达出较强的绿色荧光；重组病毒与母本病毒具有相似的复制动力学特征和致细胞病变效应。结论成功拯救了EGFP标记的重组病毒EGFP-EV-A71。

简介：摘要2019新型冠状病毒（2019-nCoV）是武汉不明原因肺炎的致病原。2019-nCoV在遗传学上与一种蝙蝠来源的新型冠状病毒比较接近，与SARS-CoⅤ、MERS-CoV同为β属冠状病毒。目前临床上常用的抗病毒药物，包括神经氨酸酶抑制剂（奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦等）、更昔洛韦、阿昔洛韦、利巴韦林等药物对2019-nCoV均无效，不建议临床应用。目前研究证实可能有效的药物包括：瑞德西韦、洛匹那韦/利托那韦、洛匹那韦/利托那韦联合干扰素-β、恢复期血浆、单克隆抗体。但这些药物在2019-nCoV肺炎患者中的疗效和安全性有待进一步临床实验证实。

简介：摘要乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染者中常见的合并感染和主要生存威胁之一。HIV/HBV合并感染者的治疗有别于单一病毒感染的治疗，需同时针对两种病毒制订抗病毒治疗方案。现结合国内外指南和抗病毒药物的临床研究数据，对HIV/HBV合并感染的临床管理提供建议，并针对我国实际情况，对HIV/HBV合并感染治疗的考量和挑战，特别是药物安全性、耐药屏障、特殊临床情况和用药规范等进行讨论。

简介：摘要2019年12月，中国武汉暴发新型冠状病毒肺炎(COVID-19)，该疾病传染性强，迅速在国内外传播，引起了高度关注。临床尚无确切有效的抗病毒治疗药物。鉴于目前疫情的紧迫性，根据推荐的诊疗方案和相关研究，本文对瑞德西韦、奥司他韦、阿比多尔、洛匹那韦/利托那韦、利巴韦林及干扰素α等试用于临床的抗病毒药物进行介绍，以期能为COVID-19的药物合理选择提供参考。

简介：摘要国家卫生健康委员会和国家中医药管理局联合印发的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第五版修正版）》推荐了3种抗病毒药物，包括干扰素α（雾化吸入）、洛匹那韦/利托那韦（口服）和利巴韦林（静脉输注）。另外，一种尚未上市的抗病毒药物瑞德西韦也在我国展开了临床试验。本文主要就干扰素、洛匹那韦/利托那韦和利巴韦林在SARS冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、人类免疫缺陷病毒感染等治疗中的安全性数据以及瑞德西韦在动物实验、Ⅰ期临床试验、治疗埃博拉病毒感染临床试验中的安全性数据及用于1例新型冠状病毒肺炎治疗的初步数据进行简要综述，为临床安全用药提供参考。

简介：摘要人腺病毒是儿童呼吸系统病毒性疾病的常见病原之一。腺病毒感染多见于婴儿和5岁以下儿童，可呈流行性、地方性或散发性。引起腺病毒肺炎的主要血清型包括1、2、3、4、5、7、8、19、21和35型，更严重的肺炎与3、7、14、21和55型有关。重症腺病毒肺炎可危及生命，部分患儿肺部可遗留永久性损伤，如闭塞性细支气管炎等，进而影响患儿的生存质量。因此，早期诊断和合理有效治疗对于改善患儿预后至关重要。现主要就儿童腺病毒肺炎的病原诊断和抗病毒治疗方面进行讨论。

简介：摘要目的研究2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染病例中人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的感染情况及流行病学特点，并对分离出的人腺病毒做全基因组序列分析。方法采集2018年4月至2019年3月济南市第四人民医院、山东大学齐鲁儿童医院、章丘区人民医院的急性呼吸道感染住院病例患者的鼻/咽拭子样本共计1 969份，采用实时荧光定量PCR的方法检测样本中呼吸道相关病原体，包括人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的阳性率，并对分离出的7株腺病毒阳性标本进行测序，以确定腺病毒型别，并构建基因进化树进行分析。结果在收集的1 969份标本中，3种呼吸道病毒阳性病例共计242例，阳性检测率为12.30 %(242/1969)，鼻病毒阳性率为3.00%(59/1969)、呼吸道合胞病毒阳性率为6.30 %(124/1969)、腺病毒阳性率为3.86%(76/1969)。不同年龄段间鼻病毒检出率差异无统计学意义(Fisher精确检验值8.376，P＝0.720)，不同年龄段间呼吸道合胞病毒、腺病毒检出率差异均有统计学意义(χ2＝19.28、12.16；P＝0.001、0.016)。不同性别间腺病毒检出率差异具有统计学意义(χ2＝14.33，P<0.001)，不同性别间鼻病毒阳性率和呼吸道合胞病毒阳性率均无统计学意义(χ2＝0.30、2.90，P＝0.862、0.089)。比较不同月份间三种病毒核酸阳性率，发现鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的检出率分别在10月份、12月份、11月份达到最高(分别为8.61%、26.50%和8.84%)。对测序的7株腺病毒阳性标本构建基因进化树后发现其均为HAdV-2型。结论2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染相关的人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒在不同组别间有不同的流行病学特点，为急性呼吸道感染的早期预防和临床治疗提供参考依据。

简介：摘要目的探讨儿童EB病毒（EBV）原发性感染血浆病毒DNA拷贝数特征及其变化规律。方法回顾性病例总结。选择2017年9月1日至2018年9月30日于复旦大学附属儿科医院诊断为EBV原发性感染的571例患儿为研究对象，收集患儿病毒实验室指标及临床信息等资料。根据血浆EBV DNA结果分为阳性组和阴性组，根据EBV DNA载量将阳性组分为高载量组和低载量组。组间差异采用χ2检验、Wilcoxon秩和检验进行比较。结果571例EBV原发性感染患儿中男334例、女237例，初诊年龄3.8（2.2，5.7）岁。阳性组255例（44.7%）、阴性组316例（55.3%）。阳性组发热、肝和（或）脾肿大、转氨酶升高的患儿比例均高于阴性组［235例（92.2%）比255例（80.7%）、169例（66.3%）比85例（26.9%）、144例（56.5%）比120例（38.0%），χ2=15.22、96.80、18.27，均P<0.001］；阳性组中有70例进行了随访，随访时间46（27，106）d，其中68例（97.1%）患儿在28 d内转阴，另2例（2.9%）患儿随访修正诊断为慢性活动性EBV感染。血浆病毒低载量组218例、高载量组37例。高载量组转氨酶升高患儿占比高于低载量组［75.7%（28/37）比56.0%（116/207），χ2=5.00，P=0.025］。外周血白细胞中EBV DNA的阳性率及拷贝数均高于血浆中EBV DNA［84.2%（266/316）比44.7%（255/571）、7.0×107（1.3×107，3.0×108）比3.1×106（1.6×106，6.1×106）拷贝/L，χ2=76.26、Z=15.23，均P<0.001］。结论免疫功能正常EBV原发性感染患儿中，血浆病毒DNA阳性患儿易有发热、肝和（或）脾肿大、转氨酶升高的临床表现。阳性血浆EBV DNA一般在初诊后28 d内转阴，多数血浆病毒高载量患儿有转氨酶升高特征。