简介：摘要目的制备pH敏感脂质体，避免溶酶体对单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A，MPLA)的降解，提高MPLA的利用率。方法以DOPE、CHEMS为载体材料，采用薄膜分散法制备pH敏感脂质体。应用动态光散射仪测定脂质体的粒径及Zeta电位，透射电镜观察不同pH值条件下pH敏感脂质体的外观形态，应用流式细胞术评价THP-1、DC2.4细胞对脂质体的吞噬效果，激光共聚焦显微镜下观察脂质体与溶酶体的共定位情况。以乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)为模式抗原，配伍MPLA pH敏感脂质体免疫BALB/c小鼠，ELISA定量检测血清乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)水平，ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数(spot forming cells, SFCs)。结果制备的pH敏感脂质体的平均粒径为(90.90±1.13) nm，多分散指数(polydispersity index, PDI)为0.076±0.013，Zeta电位为(－27.900±0.666) mV，随着溶液的pH值减小粒径明显增大，呈现不规则形态，具备显著的pH敏感性。THP-1细胞吞噬pH敏感荧光脂质体的吞噬率为10.40%，DC2.4细胞的吞噬率为12.40%，吞噬荧光脂质体的吞噬率分别为1.09%和0.28%。激光共聚焦显微镜观察到pH敏感荧光脂质体被THP-1细胞吞噬后，存在于细胞质中，而荧光脂质体存在于溶酶体中，MPLA pH敏感脂质体与MPLA脂质体比较可以显著提高小鼠细胞免疫应答水平，MPLA pH敏感脂质体组的IFN-γ和IL-2 SFCs水平均显著高于MPLA脂质体组(P<0.01)和无佐剂组(P<0.001)。结论pH敏感脂质体递送系统可以提高MPLA的利用率，使MPLA更好地发挥佐剂作用。

简介：摘要目的应用CHO细胞表达系统表达重组水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus，VZV)gEΔ-Fc融合蛋白，为筛选重组带状疱疹疫苗候选抗原提供参考。方法将含有编码gEΔ-Fc基因的真核表达质粒转染CHO细胞，经MSX加压筛选和有限稀释法挑选单克隆，获得分泌表达gEΔ-Fc融合蛋白的CHO细胞株。MabSelect SuRe亲和层析纯化gEΔ-Fc融合蛋白，ELISA法对gEΔ-Fc融合蛋白与Fc受体结合进行鉴定，流式细胞术检测DC2.4细胞对抗原的吞噬效果。gEΔ-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠后，ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果获得表达gEΔ-Fc融合蛋白的CHO细胞株；流式细胞术证明DC2.4细胞对gEΔ-Fc融合蛋白的吞噬强于gE；gEΔ-Fc融合蛋白可以诱导BALB/c小鼠产生高滴度的抗VZV抗体。结论应用CHO细胞表达的重组VZV gEΔ-Fc融合蛋白具有较好的免疫原性。本研究为筛选重组带状疱疹疫苗候选抗原提供了数据支持。