简介：摘要2019年底，美国糖尿病学会发布了2020年最新糖尿病诊疗标准，笔者节选糖尿病微血管病变及足病章节（第11章节），主要包括对慢性肾病以及糖尿病足病的推荐意见及理论依据的修订部分进行解读。该章节旨在为糖尿病微血管病变及足病的治疗提供临床实践建议，为临床诊疗提供依据。

简介：摘要目的探讨蛆虫清创疗法(MDT)促进糖尿病足溃疡(DFU)患者创面血管新生的机制。方法(1)将东部战区空军医院2018年6月—2019年6月收治的符合入选标准的12例应用MDT(疗程为3 d)的DFU患者[男6例、女6例，年龄(56±12)岁]、12例无糖尿病的急性外伤患者[男6例、女6例，年龄(53±10)岁]分别设为DFU组与外伤无糖尿病组。应用MDT前后观察DFU组患者创面大体情况并留取创面组织，留取外伤无糖尿病组患者首次就诊时清创前创面组织，采用免疫组织化学法检测DFU组患者应用MDT前后创面组织中血管新生标志物CD31的表达，分别采用蛋白质印迹法、实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测DFU组患者应用MDT前后及外伤无糖尿病组患者清创前创面组织中脂肪酸合成酶(FAS)的蛋白、mRNA表达。(2)用含体积分数10%胎牛血清的内皮细胞培养基体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，取第3～6代对数生长期细胞进行以下实验。取3 d龄无菌丝光绿蝇幼虫，提取分泌排泄物(ES)用于后续实验。取3个批次细胞，均分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、单纯高糖组、高糖＋5 μg/mL蛆虫ES组和高糖＋10 μg/mL蛆虫ES组，分别加入PBS、终物质的量浓度20 mmol/L葡萄糖、终物质的量浓度20 mmol/L葡萄糖＋终质量浓度5 μg/mL蛆虫ES、终物质的量浓度20 mmol/L葡萄糖＋终质量浓度10 μg/mL蛆虫ES处理，各组试剂总体积相同。培养48 h，分别采用蛋白质印迹法、实时荧光定量RT-PCR法和免疫荧光法检测各批次细胞中FAS的蛋白、mRNA表达情况及细胞内FAS蛋白表达与定位情况，其中mRNA表达样本数为3。(3)取2个批次细胞，均分为单纯小干扰RNA(siRNA)对照组、siRNA对照＋蛆虫ES组、siRNA-FAS＋蛆虫ES组，分别转染终物质的量浓度为100 μmol/L的无意义对照siRNA、无意义对照siRNA、siRNA-FAS 4～6 h，之后分别加入PBS、终质量浓度10 μg/mL蛆虫ES、终质量浓度10 μg/mL蛆虫ES常规培养24 h，各组试剂的总体积相同。1个批次细胞进行划痕试验，划痕后24 h观察划痕宽度，检测细胞迁移能力；1个批次细胞进行成管实验，培养24 h后观察细胞小管生成情况。划痕试验和成管实验样本数均为3。对数据行t检验、单因素方差分析、LSD检验、重复测量方差分析及Bonferroni法。结果(1)与应用MDT前比较，DFU组患者应用MDT后创面新鲜肉芽组织明显增多，坏死组织明显减少；创面组织中CD31表达明显增多。DFU组患者应用MDT前创面组织中FAS蛋白表达较外伤无糖尿病组清创前明显减少，DFU组患者应用MDT后创面组织中FAS蛋白表达较应用MDT前明显增多。DFU组患者应用MDT前创面组织中FAS mRNA表达量为1.00±0.17，较外伤无糖尿病组清创前的3.87±1.02明显减少(t＝9.808，P<0.01)；DFU组患者应用MDT后创面组织中FAS mRNA表达量为1.85±0.31，较应用MDT前明显增多(t＝-10.853，P<0.01)。(2)培养48 h，蛋白质印迹法检测显示，单纯高糖组细胞中FAS蛋白表达较PBS对照组明显减少，高糖＋5 μg/mL蛆虫ES组、高糖＋10 μg/mL蛆虫ES组细胞中FAS蛋白表达较单纯高糖组明显增多。实时荧光定量RT-PCR法检测显示，单纯高糖组细胞中FAS mRNA相对表达量为0.392±0.073，较PBS对照组的1.000±0.085明显减少(P<0.01)；高糖＋5 μg/mL蛆虫ES组和高糖＋10 μg/mL蛆虫ES组细胞中FAS mRNA相对表达量分别为0.561±0.047、0.687±0.013，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，且均较单纯高糖组显著增多(P<0.01)。免疫荧光法检测结果显示，各组细胞内FAS蛋白主要定位在细胞质中，表达情况与蛋白质印迹法检测结果相近。(3)划痕后24 h，siRNA对照＋蛆虫ES组、siRNA-FAS＋蛆虫ES组细胞划痕未愈合宽度明显窄于单纯siRNA对照组(P<0.01)，siRNA-FAS＋蛆虫ES组细胞划痕未愈合宽度明显宽于siRNA对照＋蛆虫ES组(P<0.01)。培养24 h，siRNA对照＋蛆虫ES组、siRNA-FAS＋蛆虫ES组细胞小管生成数明显多于单纯siRNA对照组(P<0.05或P<0.01)，siRNA-FAS＋蛆虫ES组细胞小管生成数明显少于siRNA对照＋蛆虫ES组(P<0.05)。结论MDT通过蛆虫ES上调FAS的表达水平促进血管内皮细胞活力，从而促进DFU患者创面血管新生。