简介:摘要目的了解克山病(KD)患者与健康人群外周血微小RNA(miRNA,miR)差异性表达情况及生物信息学特征,探讨KD的发病机制。方法在山东省五莲县KD重病区选择10例慢型KD患者作为KD组,同时在山东省东昌府区非KD病区选择10例健康人群作为对照组。采集肘静脉血,分离血浆,应用转录组测序技术(RNA-seq)构建KD组和对照组的差异miRNA表达谱,利用Starbase、miRTarBase、miRDB及TargetScan数据库进行筛选,将数据库中共有的mRNA定义为该miRNA的靶基因,对靶基因进行基因本体功能(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果将KD组的miRNA表达谱与对照组进行差异表达分析,共筛选出132个差异表达的miRNA,其中上调的有90个,下调的有42个;通过Starbase、miRTarBase、miRDB及TargetScan数据库继续筛选获得了53个miRNA,共靶向737个mRNA。GO分析显示,差异表达基因主要参与Ras蛋白的信号转导、跨膜转运、细胞周期调控及细胞黏附等生物学过程;KEGG通路分析显示,差异表达基因主要参与病毒感染、内吞作用、粘着斑、肌动蛋白调节等通路。结论应用RNA-seq技术成功获得KD患者与健康人群的miRNA差异表达谱,并筛选出可能与KD相关的通路及基因。
简介:摘要:随着我国建筑工程和我国社会经济水平的快速发展,人们对生活质量的追求也在提高,尤其是生活环境的安全与舒适能够直接影响到人民群众对建筑行业的满意度和信任度。所以建筑行业需要重视建筑工程项目的管理风险以及相应的风险防范。做好管理风险的有效防范,不仅能够在一定程度上提升建筑工程的整体质量,还能为人们创造一个安全舒适的生活环境,对于社会持续发展也有着极强的推动作用。基于此,建设企业与施工单位都应重视施工过程中的管理风险研究,将风险管理进行合理分类,并针对风险类型采取科学化的防范措施,以保障建筑工程项目能够安全、如期完成,推动建筑行业的良性发展,为社会的持续发展贡献力量。
简介:摘要目的探讨川乌提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法分别用2.5 g/L(AR 2.5 g/L组)、5.0 g/L(AR 5.0 g/L组)和7.5 g/L(AR 7.5 g/L组)川乌提取物处理HUVECs(购自中国科学院上海细胞库),对照组(Con)未行川乌提取物处理。将微小RNA(miRNA,miR)-NC(miR-NC组)、miR-589(miR-589组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)和anti-miR-589(anti-miR-589组)分别转染至HUVECs中;将anti-miR-NC、anti-miR-589、pcDNA3.1、pcDNA3.1-蛋白激酶B1(Akt1)转染至HUVECs细胞后用5.0 g/L的川乌提取物处理,分别标记为AR 5.0 g/L+anti-miR-NC组、AR 5.0 g/L+anti-miR-589组、AR 5.0 g/L+pcDNA3.1组和AR 5.0 g/L+pcDNA3.1-Akt1组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-589的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-589和Akt1的靶向关系。两组间比较采用t检验。多组间比较采用SNK-q检验。结果不同浓度川乌提取物组HUVECs细胞增殖活性、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和miR-589表达均显著低于Con组(F=107.822、86.321、136.234,P<0.05),凋亡率、p21和bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达显著高于Con组(F=95.875、124.365、107.541,P<0.05)。miR-589组HUVECs增殖活性、Cyclin D1和bcl-2蛋白表达显著高于miR-NC组(t=15.358、31.109、8.971,P<0.05),凋亡率、p21和bax蛋白表达显著低于miR-NC组(t=23.124、21.175、11.364,P<0.05),抑制miR-589表达可逆转川乌提取物对HUVECs增殖和凋亡的作用。miR-589可靶向调控Akt1的表达。结论川乌提取物可抑制HUVECs增殖并促进细胞凋亡,可能与调控miR-589/Akt1有关。
简介:摘要:天然气长输管道是一个复杂的问题,管理内容包括天然气管道的完整性管理,天然气管道的环境管理和天然气管道的耐腐蚀管理。近年来,我国天然气管道安全研究取得了一些突破。但是,与国外相比,天然气管道的研究还处于起步阶段。因此,我们应该借鉴国外天然气管道长期风险管理的先进经验和技术,结合我国天然气管道的长期实际情况,制定预防和保护措施,以减少事故的发生。随着经济的快速发展,煤炭作为主要能源的发展已经对环境产生了影响,例如雾霾。我们需要寻找其他能源,对天然气的需求正在增加,长途天然气管道的管理是一项复杂的项目管理活动,然而安全是管理中最重要的问题。安全问题不仅会影响天然气的运输,还会带来一定的经济损失和意外伤亡。因此,本文有效地分析了天然气管道长期存在的潜在安全隐患,并针对这些隐患提出了相应的防护措施,为天然气管道长期安全管理提供参考和帮助。
简介:摘要目的通过体外T细胞识别自体树突状细胞(dendritic cell,DC)加工递呈的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)特异性抗原,探讨靶向HBV-C、E、X基因的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对体外靶细胞的特异性杀伤效应。方法利用基因重组技术分别将HBV-C、HBV-E、HBV-X三种抗原负载至腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)上,获得重组腺相关病毒(recombinat adeno-associated virus,rAAV)。通过Ficoll法分离得到外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),经HBV-C-rAAV、HBV-E-rAAV、HBV-X-rAAV分别转染单核细胞并诱导分化为成熟DC。上述DC分4组,分别为阴性对照组(未转染组)和HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC组(转染组)。通过流式细胞术检测rAAV的转染率,并检测DC表面的标志分子和DC分泌的细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-10、IL-12。将体外培养的T细胞分别与未转染组DC、HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC混合,利用混合淋巴细胞反应收获CTLs,利用流式细胞术检测CTLs表面的标志分子以及分泌的细胞因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ),并用3H-TdR掺入法检测T细胞的体外增殖能力。通过51Cr释放实验计算CTLs对靶细胞的杀伤率。结果对照组和转染组(HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC)中,HBV抗原阳性的DC比例分别为2.80%、85.12%、96.63%、98.42%。转染组中表达CD80的DC比例分别是55.26%、58.25%、59.63%,表达CD83的比例分别是43.19%、48.73%、40.01%,表达CD86的比例分别是95.46%、96.74%、83.62%,分泌IL-12的比例分别是47.60%、52.50%、69.20%。经转染组DC诱导产生的T细胞亚群中,CD8+CD69+T细胞的比例分别为33.10%、31.50%、30.00%,CD4+CD25+T细胞的比例分别为11.89%、8.77%、10.87%,分泌IFN-γ的比例分别为44.65%、45.16%、45.16%,T细胞体外增殖力(cpm值)分别为19 351、19 070、26 428。经转染组DC诱导产生CTLs对HBV抗原阳性的原代肝癌细胞(hepatoma cancer cells,HCC)组的杀伤率分别为61.18%、56.93%、65.05%,对HBV抗原阴性的宫颈癌细胞组的杀伤率分别为4.62%、3.69%、4.34%,对HCC+HBV抗体封闭组的杀伤率分别为34.90%、27.39%、30.66%,对HCC+主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)-Ⅰ类分子抗体封闭组的杀伤率分别为17.83%、21.47%、23.71%。转染组DC诱导产生的CTLs能有效杀死HBV抗原阳性的靶细胞,在抗原表达下降后,其杀伤能力显著减弱,MHC-Ⅰ类分子的缺失也会导致CTLs杀伤能力的明显降低。结论健康人外周血中分离出的单核细胞和淋巴细胞,可在体外通过特定细胞因子的诱导、携带不同HBV基因片段的rAAV的转染和细胞共培养,最终获得HBV特异性杀伤能力显著增强的CTLs,且该类T细胞具有很强的细胞增殖能力,有利于持续杀伤靶细胞;CTLs对靶细胞的杀伤作用依赖于HBV抗原和MHC-Ⅰ类分子的表达。